本文關(guān)鍵詞：甲羥戊酸代謝途徑紊亂對(duì)原代角質(zhì)形成細(xì)胞增殖、分化及凋亡的影響

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【摘要】：目的探討甲羥戊酸代謝途徑紊亂對(duì)原代角質(zhì)形成細(xì)胞(KCs)增殖、分化及凋亡的影響,以及參與調(diào)控的可能的分子機(jī)制,為更清楚的了解播散型淺表性光化性汗孔角化癥(DSAP)的病理及分子機(jī)制提供依據(jù)。方法(1)培養(yǎng)人原代皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞(KCs),利用催化甲羥戊酸途徑順利進(jìn)行的關(guān)鍵酶的特異性抑制劑(羥甲基戊二酸單酰輔酶A還原酶抑制劑(Pravastatin(PRA),法尼基合成酶抑制劑(Alendonate(ALD),法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑(FTI-277)和香葉基轉(zhuǎn)移酶抑制(GGTI-298)單獨(dú)或聯(lián)合甲羥戊酸途徑代謝產(chǎn)物(甲羥戊酸(MVA),法尼焦磷酸(FPP),香葉基香葉焦磷酸(GGPP),膽固醇(CH))來(lái)處理角質(zhì)形成細(xì)胞2d后,MTS及流式細(xì)胞術(shù)分析其對(duì)細(xì)胞活力及細(xì)胞周期的影響。提取細(xì)胞總蛋白,Western-blot檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白cyclinB1, cyclinE,p21的表達(dá)量,同時(shí)分析對(duì)絲裂原激活的蛋白激酶-胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(MAPKs-ERK1/2)信號(hào)通路以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B信號(hào)通路的影響。(2)按照上述方式處理KC細(xì)胞2 d,加入Ca2+(1.2mM)刺激細(xì)胞1d后,提取細(xì)胞總蛋白,采用Western-blot法檢測(cè)其對(duì)Ca2+誘導(dǎo)的原代角質(zhì)形成細(xì)胞(KC)化maker (Involucrin, Keratin 1)的表達(dá)影響并分析對(duì)p53,Notch1及絲裂原激活的蛋白激酶-胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶(MAPKs-ERK1/2)信號(hào)通路以及磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)/蛋白激酶B信號(hào)通路的影響。(3)同樣按照上述方式處理KC細(xì)胞,流式細(xì)胞術(shù)分析對(duì)細(xì)胞凋亡的影響。結(jié)果(1)增殖結(jié)果：MTS結(jié)果顯示,PRA和ALD強(qiáng)烈抑制KC細(xì)胞增殖,FTI和GGTI也抑制細(xì)胞增殖,但程度相對(duì)較弱。只有CH能夠部分補(bǔ)救PRA和ALD對(duì)細(xì)胞造成的增殖抑制效應(yīng)。此外,MVA,FPP，，GGPP產(chǎn)生部分增殖抑制效應(yīng)。流式-周期結(jié)果顯示,PRA和ALD將KC細(xì)胞阻滯在G1期,同時(shí)CH能夠補(bǔ)救PRA及ALD產(chǎn)生的G1期阻滯效應(yīng)。FPP,GGPP本身也有一定的G1阻滯作用。此外,FTI,GGTI對(duì)細(xì)胞周期無(wú)明顯影響。Western-blot結(jié)果表明,PRA,ALD,FTI,GGTI單獨(dú)或聯(lián)合作用均很大程度地下調(diào)cyclinB1而上調(diào)cyclinE,p21的表達(dá)。同時(shí)也能促進(jìn)PI3K-AKT信號(hào)通路,抑制MAPKs-ERK1/2信號(hào)通路的激活狀態(tài)。(2)分化結(jié)果：Western-blot結(jié)果表明PRA,ALD,FTI,GGTI單獨(dú)或聯(lián)合使用均抑制Ca2+誘導(dǎo)的Involucrin的表達(dá)；所有的抑制劑單獨(dú)或聯(lián)合處理KC細(xì)胞均能下調(diào)p53,Notchl的表達(dá)；信號(hào)通路研究表明,Ca2+激活A(yù)KT,抑制ERK1/2的活化狀態(tài),ALD單獨(dú)及四種抑制劑聯(lián)合處理KC細(xì)胞能上調(diào)AKT的磷酸化水平,而PRA,FTI,GGTI均下調(diào)AKT,上調(diào)ERK1/2的磷酸化水平。(3)流式-凋亡結(jié)果顯示,甲羥戊酸代謝途徑紊亂對(duì)KC細(xì)胞凋亡不產(chǎn)生明顯的影響。結(jié)論甲羥戊酸代謝途徑紊亂能夠抑制原代角質(zhì)形成細(xì)胞(KCs)的增殖、分化,但不影響凋亡。
【關(guān)鍵詞】：甲羥戊酸途徑 KC細(xì)胞 DSAP 增殖 分化 凋亡
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R758.5
【目錄】：

• 英文縮略詞表6-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 1 引言12-16
• 2 材料與方法16-27
• 3 結(jié)果27-50
• 4 討論50-53
• 5 結(jié)論53
• 6 參考文獻(xiàn)53-59
• 附錄59-60
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷59-60
• 致謝60-61
• 綜述61-69
• 1.甲羥戊酸途徑關(guān)鍵酶及其作用62-63
• 2.甲羥戊酸途徑與心血管疾病的關(guān)系63
• 3.甲羥戊酸途徑與神經(jīng)疾病的關(guān)系63-64
• 4.甲羥戊酸途徑與腫瘤的關(guān)系64-65
• 5.甲羥戊酸途徑展望65
• 6.參考文獻(xiàn)65-69

【相似文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：813251