本文關(guān)鍵詞：尋常性銀屑病皮損γδT細胞、Vγ9T細胞定量分析及IL-17A表達

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【摘要】：目的銀屑病是臨床上常見的由免疫介導(dǎo)的慢性炎癥性皮膚疾病,其主要組織病理改變是以角質(zhì)形成細胞過度增生、大量白細胞浸潤和新生血管形成為特點。依據(jù)臨床表現(xiàn)分為尋常性、關(guān)節(jié)病性、膿皰性、紅皮病性四型。臨床上以尋常性銀屑病患者最為常見,白色鱗屑、發(fā)亮薄膜和點狀出血是本病的臨床特征。銀屑病的發(fā)病機制尚不完全清楚。既往研究傾向認為銀屑病是一種T淋巴細胞相關(guān)的自身免疫性皮膚病,輔助型T細胞-17(Th17)表達的白細胞介素-17(IL-17)與銀屑病的發(fā)生、發(fā)展之間的關(guān)系越來愈密切。但在研究中Th17細胞并不能解釋1L-17調(diào)節(jié)的一些早期免疫應(yīng)答,隨著研究的深入,發(fā)現(xiàn)免疫細胞7δT細胞才是重要的產(chǎn)生1L-17的固有細胞。目前在銀屑病與7δT細胞相關(guān)性的研究多集中在銀屑病鼠模型研究,大樣本的銀屑病患者臨床研究尚未見國內(nèi)外文章報道。本研究擬在尋常性銀屑病患者的正常皮膚組織和患處皮損組織作對比,觀察組織中CD3。。T細胞、TCR γ/δ、TCR-Vγ9及細胞因子1L-17A表達差異,用以分析7δT細胞、V79T細胞及細胞因子1L-17A在尋常性銀屑病發(fā)病中的相關(guān)作用,進而探討研究銀屑病的發(fā)病機理,為臨床治療提供新的方向,不僅具有較高的學(xué)術(shù)價值而且具有廣闊的應(yīng)用前景。方法本實驗應(yīng)用免疫熒光組化方法檢測尋常性銀屑病患者的正常皮膚組織和患處皮損組織中7δT細胞、V79T細胞及細胞因子1L-17A的表達。分別制備其正常皮膚組織和患處皮損組織的石蠟和冰凍切片,選用PerCP/Cy5.5 anti-humanCD3和FITC anti-human TCR γ/δ, PerCP/Cy5.5 anti-human CD3和PE anti-human TCR Vγ9、FITC anti-human TCR γ/δ和APC anti-human IL-17A抗體直接法進行雙染。熒光顯微鏡照相后通過Image-ProPlus和ImageJ軟件進行細胞計數(shù)、平均熒光強度分析。最后統(tǒng)計數(shù)據(jù),利用spss13.0統(tǒng)計軟件進行結(jié)果分析。結(jié)果通過熒光顯微鏡觀測,尋常性銀屑病患者的皮損里分布著大量的CD3+。T細胞,皮損區(qū)真皮內(nèi)可見到數(shù)量較多的7δT細胞、Vγ9T細胞表達,同時在健康人正常皮膚及尋常性銀屑病患者的非皮損區(qū)的真皮內(nèi)也可見γδT細胞、Vγ9T細胞表達。同時可見真皮中大量1L-17A浸潤。γδT細胞的數(shù)量,在尋常性銀屑病患者皮損區(qū)的表達顯著高于非皮損區(qū)和健康人正常皮膚,p0.0001；Vγ9T細胞的數(shù)量,在尋常性銀屑病患者皮損區(qū)的表達也顯著高于非皮損區(qū)和健康人正常皮膚的表達,p0.0001,有統(tǒng)計學(xué)意義。Vγ9T細胞占CD3+T細胞的百分含量在尋常性銀屑病患者皮損和非皮損區(qū)對比健康人均顯著增高,p0.0001,有統(tǒng)計學(xué)意義。但Vγ細胞占CD3+T細胞的百分含量在尋常性銀屑病患者皮損區(qū)和非皮損區(qū)兩者間,p0.05,無顯著性差異。γδT細胞、Vγ9T細胞表達水平與PASI評分值之間在皮損區(qū)和非皮損區(qū)統(tǒng)計結(jié)果均有統(tǒng)計學(xué)意義,p0.05,(r=0.906,r=0.987)呈正相關(guān)�；颊咂p區(qū)IL-17A平均熒光強度顯著高于非皮損區(qū),差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.0001)；患者皮損區(qū)IL-17A平均熒光強度顯著高于健康人,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.0001)；患者IL-17A非皮損區(qū)IL-17A平均熒光強度顯著高于健康人,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(p0.0001)。且銀屑病患者皮損區(qū)及非皮損區(qū)IL-17A平均熒光強度與PASI評分值有相關(guān)性,p0.05,有統(tǒng)計學(xué)意義,(r=0.821,r=0.959,r=0.996,r=0.991)且呈正相關(guān)。結(jié)論尋常性銀屑病患者皮損區(qū)及非皮損區(qū)均有γδT細胞及Vγ9T細胞分布,細胞數(shù)量較多；γδT細胞及Vγ9T細胞主要聚集在銀屑病患者皮膚的真皮層；皮損區(qū)γδT細胞及Vγ9T細胞數(shù)量明顯高于它們在非皮損區(qū)及健康人皮膚組織中的數(shù)量；患者皮損區(qū)γδT細胞、Vγ9T細胞數(shù)量及IL-17A的表達量均與銀屑病病情嚴重程度相關(guān),高表達量的IL-17A會導(dǎo)致銀屑病患者嚴重的皮膚損害,隨著IL-17A的表達水平下降,其損害程度也相應(yīng)減弱；同時,IL-17A的表達與γδT細胞及Vγ9T細胞增殖數(shù)量相關(guān)。由此推論,患者真皮內(nèi)的γδT細胞及Vγ9T細胞與尋常性銀屑病的發(fā)生發(fā)展,可能存在密切關(guān)系。并且,1,δT細胞,尤其是Vγ9T可能是IL-17A的主要來源。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 γδT細胞 Vγ9T細胞 IL-17A
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語/符號說明11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 一、γδT細胞、Vγ9T細胞陽性對照組設(shè)立15-19
• 1.1 對象和方法15-16
• 1.1.1 實驗對象15
• 1.1.2 實驗材料與方法15-16
• 1.2 結(jié)果16-17
• 1.3 討論17-18
• 1.4 小結(jié)18-19
• 二、γδT細胞、Vγ9T細胞對照組設(shè)立19-22
• 2.1 對象和方法19-20
• 2.1.1 實驗對象19
• 2.1.2 實驗材料與方法19-20
• 2.2 結(jié)果20-21
• 2.3 討論21
• 2.4 小結(jié)21-22
• 三、尋常性銀屑病皮膚中γδT細胞、Vγ9T細胞定量分析22-38
• 3.1 對象和方法22-25
• 3.1.1 病例來源22
• 3.1.2 實驗材料與方法22-25
• 3.2 結(jié)果25-35
• 3.2.1 尋常性銀屑病患者皮損區(qū)、非皮損區(qū)及正常人皮膚組織免疫熒光染色25-26
• 3.2.2 尋常性銀屑病患者皮膚內(nèi)γδT細胞、Vγ9T細胞水平26-27
• 3.2.3 尋常性銀屑病患者皮膚內(nèi)γδT細胞、Vγ9T細胞總量估算方法27-35
• 3.3 討論35-36
• 3.4 小結(jié)36-38
• 四、尋常性銀屑病患者皮膚中IL-17A表達38-46
• 4.1 對象和方法38-41
• 4.1.1 病例來源38
• 4.1.2 實驗材料與方法38-41
• 4.2 結(jié)果41-44
• 4.2.1 尋常性銀屑病患者皮損區(qū)、非皮損區(qū)及正常人皮膚組織IL-17A表達41-42
• 4.2.2 IL-17A平均熒光強度分析及其與PASI評分相關(guān)性分析42-44
• 4.3 討論44-45
• 4.4 小結(jié)45-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-53
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明53-54
• 附錄54-57
• 綜述57-74
• 參考文獻65-74
• 致謝74

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本文編號：803317