本文關(guān)鍵詞：脂筏在β1整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的惡性黑色素瘤細(xì)胞鋪展中的作用及機(jī)制研究

  更多相關(guān)文章： 黑色素瘤細(xì)胞鋪展 脂筏 β1整聯(lián)蛋白簇集 黏著斑 接頭蛋白

【摘要】：腫瘤細(xì)胞自身的遷移性運動在腫瘤轉(zhuǎn)移的各個階段扮演了至關(guān)重要的角色。體內(nèi)研究表明，腫瘤細(xì)胞必須與胞外基質(zhì)相互作用，才能突破致密的組織屏障，最終遷移到新的組織器官。體外研究表明，應(yīng)答于胞外基質(zhì)，腫瘤細(xì)胞發(fā)生有效的黏附和鋪展是其遷移進(jìn)程中的基本事件，這依賴于整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞-基質(zhì)相互作用。通過與胞外基質(zhì)的相互作用及由此所引發(fā)的簇集，整聯(lián)蛋白誘發(fā)了初始黏著斑的形成，并將胞外基質(zhì)和細(xì)胞骨架有效連接。但是，整聯(lián)蛋白自身功能的發(fā)揮受到多種因素的調(diào)節(jié)。 脂筏是細(xì)胞膜上一類富含膽固醇和鞘脂類的液態(tài)有序微區(qū)結(jié)構(gòu)。通過選擇性的排除或包含一些蛋白，脂筏為蛋白-蛋白、蛋白-脂或脂-脂之間的相互作用提供了一個時空平臺。脂筏的結(jié)構(gòu)和功能特點使其近年來一直處于細(xì)胞膜研究的前沿，而且其在細(xì)胞運動中的作用機(jī)制已經(jīng)引起許多研究者的關(guān)注。報道也已經(jīng)顯示，脂筏是包括整聯(lián)蛋白在內(nèi)的多種與細(xì)胞遷移相關(guān)的膜受體排布和功能的關(guān)鍵調(diào)節(jié)者。但是，脂筏在整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的腫瘤細(xì)胞黏附和鋪展中的作用及機(jī)制并不清楚。 在本研究中，我們證明，脂筏的完整性對于β1整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的黑色素瘤A375細(xì)胞在纖黏連蛋白fibronectin上的鋪展是關(guān)鍵的。我們流式細(xì)胞儀的結(jié)果顯示，β3和β1整聯(lián)蛋白均高表達(dá)于惡性黑色素瘤A375細(xì)胞表面。通過細(xì)胞黏附和鋪展試驗，我們發(fā)現(xiàn)，β3整聯(lián)蛋白主要介導(dǎo)A375細(xì)胞在fibronectin上的黏附，而β1整聯(lián)蛋白主要介導(dǎo)A375細(xì)胞在fibronectin上的鋪展；用MβCD擾亂脂筏阻抑了β1整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的A375細(xì)胞在fibronectin上的鋪展而不是β3整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的A375細(xì)胞黏附。通過免疫熒光雙標(biāo)記，我們發(fā)現(xiàn)，β1整聯(lián)蛋白的簇集依賴于脂筏的完整性，脂筏的擾亂導(dǎo)致β1整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的黏著斑形成和肌動蛋白骨架重排的受阻。進(jìn)一步，我們利用免疫共沉淀和脂筏成份分離試驗，探討了脂筏調(diào)控β1整聯(lián)蛋白簇集的相關(guān)機(jī)制，發(fā)現(xiàn)完整的脂筏能夠富集和修飾一些與整聯(lián)蛋白簇集密切相關(guān)的接頭蛋白（talin、α-actinin、vinculin、paxillin和FAK）。脂筏可能調(diào)節(jié)了這些接頭蛋白在脂筏級份中的定位，便利了它們到β1整聯(lián)蛋白尾部的募集。最后，利用transwell和wound healing模型，我們發(fā)現(xiàn)脂筏的擾亂顯著阻抑了A375細(xì)胞的遷移。我們的研究揭示，擾亂脂筏可能是干預(yù)和治療β1整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的惡性腫瘤轉(zhuǎn)移的一種有效策略。
【關(guān)鍵詞】：黑色素瘤細(xì)胞鋪展 脂筏 β1整聯(lián)蛋白簇集 黏著斑 接頭蛋白
【學(xué)位授予單位】：東北師范大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 英文縮略詞8-11
• 引言11-32
• 一、整聯(lián)蛋白概述12-19
• （一）整聯(lián)蛋白的發(fā)現(xiàn)和結(jié)構(gòu)12-13
• （二）整聯(lián)蛋白的配體及分類13-14
• （三）整聯(lián)蛋白的功能14-16
• （四）整聯(lián)蛋白與腫瘤細(xì)胞遷移16-17
• （五）整聯(lián)蛋白行為的調(diào)節(jié)17-19
• 二、脂筏概述19-24
• （一）脂筏模型的提出19-20
• （二）脂筏結(jié)構(gòu)的動態(tài)變化20-22
• （三）脂筏的功能22-23
• （四）脂筏與整聯(lián)蛋白介導(dǎo)的細(xì)胞黏附和遷移23-24
• （五）脂筏與疾病24
• 三、黏著斑概述24-30
• （一）黏著斑的發(fā)現(xiàn)、成分和分類24-26
• （二）黏著斑動態(tài)變化的調(diào)節(jié)26-28
• （三）黏著斑在細(xì)胞遷移中的作用28-30
• 四、本論文研究的目的和意義30-32
• 實驗材料與方法32-43
• 一、實驗材料32-37
• （一）細(xì)胞32
• （二）抗體32-33
• （三）試劑33
• （四）siRNA 序列33-34
• （五）主要儀器及設(shè)備34
• （六）主要溶液34-37
• 二、實驗方法37-43
• （一）細(xì)胞培養(yǎng)37
• （二）細(xì)胞轉(zhuǎn)染37-38
• （三）細(xì)胞靜止黏附與鋪展實驗38
• （四）層流檢測38
• （五）細(xì)胞遷移實驗38-39
• （六）免疫熒光標(biāo)記和共聚焦顯微鏡39
• （七）流式細(xì)胞儀分析39-40
• （八）免疫共沉淀40
• （九）SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳40-41
• （十）免疫印跡41
• （十一）脂筏提取和點雜交41-43
• 實驗結(jié)果與分析43-62
• 一、β1 和β3 整聯(lián)蛋白在 A375 細(xì)胞黏附和鋪展中具有不同的功能43-46
• 二、脂筏對 A375 細(xì)胞黏附和鋪展行為的影響46-50
• 三、A375 細(xì)胞黏著斑的初始形成依賴于脂筏調(diào)控的β1 整聯(lián)蛋白簇集50-54
• 四、脂筏與β1 整聯(lián)蛋白共簇集于 A375 細(xì)胞的突出邊緣54-56
• 五、脂筏為β1 整聯(lián)蛋白募集各種接頭蛋白提供了時空平臺56-59
• 六、脂筏擾亂削弱了 A375 細(xì)胞的遷移59-62
• 討論62-66
• 一、β1 和β3 整聯(lián)蛋白在 A375 細(xì)胞黏附和起始鋪展中扮演不同的角色62-63
• 二、脂筏通過調(diào)節(jié)β1 整聯(lián)蛋白的簇集控制黏著斑的形成63-64
• 三、脂筏富集和磷酸化接頭蛋白，調(diào)控它們與β1 整聯(lián)蛋白的相互作用64-66
• 參考文獻(xiàn)66-77
• 結(jié)論77-78
• 創(chuàng)新點78-79
• 致謝79-80
• 在學(xué)期間公開發(fā)表論文情況80

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：796793