發(fā)布時間：2017-08-20 04:04

  本文關(guān)鍵詞：Hsa-miR-363、Hsa-miR-423-5p對HaCaT細胞表達VEGF的調(diào)控研究

  更多相關(guān)文章： 銀屑病 hsa-miR-363 hsa-miR-423-5P HaCaT細胞 VEGF

【摘要】：目的：探討人工構(gòu)建的hsa-miR-363和hsa-miR-423-5P兩條micro RNAs對人HaCaT細胞表達血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的調(diào)控作用,預測hsa-miR-363和hsa-miR-423-5P在銀屑病領(lǐng)域的應用前景。 方法：培養(yǎng)人永生角質(zhì)形成細胞(HaCaT細胞株),培養(yǎng)完成后進行細胞鋪板,本次實驗設(shè)有hsa-miR-363模擬物組、hsa-miR-363抑制物組、hsa-miR-423-5p模擬物組、hsa-miR-423-5p抑制物組、模擬物陰性對照組、抑制物陰性對照組和空白對照組共7組,根據(jù)需要做好復孔,然后加入轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染,再用MTT法檢測HaCaT細胞增殖活性和細胞轉(zhuǎn)染的成果,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染細胞中VEGF基因的mRNA水平,ELISA法觀察hsa-miR-363和hsa-miR-423-5p對VEGF蛋白表達水平的調(diào)控效應。 結(jié)果：MTT實驗結(jié)果顯示hsa-miR-363模擬物、hsa-miR-363抑制物、hsa-miR-423-5p模擬物、hsa-miR-423-5p、抑制物、模擬物陰性對照和抑制物陰性對照六組24h、48h、72h的細胞增殖活性有統(tǒng)計學意義(P0.05),在光學顯微鏡下觀察到細胞生長狀態(tài)良好,代表轉(zhuǎn)染效果良好。隨著時間的推移細胞增殖抑制率逐漸升高,到72h時達到最高,同樣代表轉(zhuǎn)染率在72h最高。隨著細胞增殖抑制率達到最高,轉(zhuǎn)染率也達到最高,效果最明顯,細胞也趨于穩(wěn)定,達到最佳狀態(tài),促使各組間差異體現(xiàn)明顯。qRT-PCR結(jié)果顯示hsa-miR-363模擬物組、hsa-miR-363抑制物組、hsa-miR-423-5p模擬物組和hsa-miR-423-5p抑制物組VEGF基因的mRNA表達水平值與空白對照組之間的P值均大于0.05,差異無統(tǒng)計學意義,即hsa-miR-363模擬物和抑制物、Hsa-miR-423-5p模擬物和抑制物對VEGF基因的mRNA表達水平無影響。ELISA結(jié)果顯示hsa-miR-363模擬物、hsa-miR-363抑制物和空白對照組各組間的VEGF蛋白表達水平均有統(tǒng)計學意義,即hsa-miR-363模擬物組的VEGF蛋白表達水平較正常組高,hsa-miR-363抑制物組的表達水平低,進一步說明hsa-miR-363可以使HaCaT細胞VEGF信號通路表達上調(diào)。Hsa-miR-423-5P模擬物、hsa-miR-423-5P抑制物、模擬物陰性對照、抑制物陰性對照和空白對照組各組間的VEGF蛋白表達水平?jīng)]有統(tǒng)計學意義,即與正常組相比VEGF蛋白的表達水平無明顯差異,進一步說明可能此條miRNA不通過VEGF信號通路調(diào)控。 結(jié)論：Has-miR-363可提高HaCaT細胞VEGF的表達,從而可以認為hsa-miR-363在銀屑病患者中通過VEGF信號通路表達上調(diào)。而hsa-miR-423-5P對HaCaT細胞VEGF的表達沒有影響,可認為hsa-miR-423-5P可能在銀屑病患者中沒有通過VEGF信號通路表達下調(diào)。銀屑病是一種遺傳基因異常性疾病,轉(zhuǎn)錄水平上的hsa-miR-363可靶向調(diào)控大量mRNA,而這個被調(diào)控的mRNA與其它1mRNA又存在錯綜復雜的相互影響和作用,共同形成網(wǎng)絡(luò)式的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)通過VEGF等多種途徑來參與銀屑病的發(fā)生。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 hsa-miR-363 hsa-miR-423-5P HaCaT細胞 VEGF
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語說明9-10
• 前言10-13
• 研究現(xiàn)狀、成果10-12
• 研究目的、方法12-13
• 1.1 對象和方法13-26
• 1.1.1 研究對象13
• 1.1.2 主要試劑及儀器13-15
• 1.1.3 實驗方法15-26
• 1.2 結(jié)果26-35
• 1.2.1 MTT結(jié)果26-27
• 1.2.2 qRT-PCR結(jié)果27-31
• 1.2.3 ELISA結(jié)果31-35
• 1.3 討論35-41
• 1.3.1 VEGF和miRNA35-39
• 1.3.2 miRNA產(chǎn)品39
• 1.3.3 轉(zhuǎn)染39-40
• 1.3.4 不足及建議40-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-47
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明47-48
• 附錄48-49
• 綜述49-65
• 綜述參考文獻59-65
• 致謝65

【參考文獻】

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本文編號：704491