本文關(guān)鍵詞：濕疹患者外周血中IL-21和Bcl-6的表達和臨床相關(guān)性研究

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【摘要】：目的:濕疹是皮損形態(tài)多樣性的慢性炎癥性皮膚病,目前研究認(rèn)為,濕疹是在復(fù)雜的內(nèi)外環(huán)境因素和多基因遺傳背景的共同影響下,發(fā)生T細(xì)胞亞群間的失衡及其相關(guān)功能因子的失調(diào)而導(dǎo)致的變態(tài)反應(yīng)性疾病。查閱國內(nèi)外文獻發(fā)現(xiàn),濾泡性輔助性T細(xì)胞(T Follicular Helper Cells,Tfh)在T細(xì)胞介導(dǎo)的免疫疾病中扮演著重要作用,Tfh細(xì)胞的主要效應(yīng)因子是白介素-21(interleukin-21,IL-21),特異性轉(zhuǎn)錄因子為B細(xì)胞淋巴瘤-6(B cell lymphoma,Bcl-6)。本課題通過研究Tfh細(xì)胞的主要效應(yīng)因子IL-21和特異性轉(zhuǎn)錄因子Bcl-6在濕疹患者和正常人外周血中的表達及差異,初步探討IL-21和Bcl-6在濕疹發(fā)病、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸中的相關(guān)免疫機制。本實驗初步探討:1.IL-21m RNA和Bcl-6m RNA在濕疹患者和正常人外周血中的表達水平以及兩者之間的表達差異;2.不同性別濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA表達水平的差異;3.IL-21m RNA和Bcl-6m RNA在不同分型濕疹患者外周血中的表達水平及其間的差異;4.在治療2周和4周后,濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平及差異;5.濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA表達水平與濕疹皮損面積及嚴(yán)重度評分(Eczema Area And Severity Index,EASI)、實驗室指標(biāo)的相關(guān)性;6.IL-21、Bcl-6之間的相關(guān)性,探討這兩個細(xì)胞因子在濕疹患者發(fā)病中的作用;方法:收集來自2014年月2月至2015年11月期間就診于天津市人民醫(yī)院皮膚科門診的60例濕疹患者為實驗組;天津醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院同期健康體檢者40例為對照組。采用實時熒光定量反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)的方法,檢測40例健康者和60例濕疹患者治療前、治療2周以及治療4周后外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達量并進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)分析。遵照EASI評分標(biāo)準(zhǔn)對濕疹患者進行濕疹面積及嚴(yán)重度指數(shù)評分。利用統(tǒng)計學(xué)軟件SPSS17.0對臨床收集數(shù)據(jù)和實驗所得的數(shù)據(jù)進行相關(guān)統(tǒng)計學(xué)處理和分析,以P0.05有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果:1.濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平均明顯低于健康對照組(IL-21的"緾T值分別為6.91±1.12 vs 1.59±0.17;Bcl-6的"緾T值分別為9.95±1.57 vs 3.40±0.56,均P0.05)。2.不同性別的濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA表達均無統(tǒng)計學(xué)差異(IL-21"緾T值男vs女:6.99±1.08 vs 6.79±1.17;Bcl-6"緾T值男vs女10.03±1.55 vs 9.84±1.63;均P0.05)。3.不同分型濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,急性濕疹I(lǐng)L-21m RNA、Bcl-6m RNA表達水平低于亞急性濕疹和慢性濕疹,亞急性濕疹I(lǐng)L-21m RNA、Bcl-6m RNA表達水平低于慢性濕疹(急性濕疹vs亞急性濕疹vs慢性濕疹I(lǐng)L-21"緾T值分別為8.25±0.34 vs 6.71±0.28 vs5.77±0.59;Bcl-6"緾T值分別為11.63±0.37 vs 10.19±0.56 vs 8.04±0.59,均P0.05)。4.經(jīng)綜合治療2周后,濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平比治療前升高,且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(IL-21的"緾T值分別為5.18±1.37、6.86±1.21;Bcl-6的"緾T值分別為8.10±1.51、9.76±1.66;均P0.05);治療4周后,濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達比治療2周后和治療前均升高,且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(IL-21的"緾T值分別為2.80±0.55 vs5.00±1.31 vs 6.73±1.13;Bcl-6的"緾T值分別為5.13±1.00 vs 7.93±1.53 vs9.60±1.60;均P0.05)。5.濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平與EASI評分及嗜酸性粒細(xì)胞均成負(fù)相關(guān),且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(均P0.001);IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達與患者年齡、白細(xì)胞計數(shù)之間無明顯相關(guān)性(均P0.05)。6.濕疹患者外周血中IL-21mRNA和Bcl-6mRNA的表達呈正相關(guān),且有統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.001)。結(jié)論:1.濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平均降低,并且與EASI評分呈負(fù)相關(guān),表明IL-21和Bcl-6兩個細(xì)胞因子可能參與了濕疹的發(fā)病過程;2.經(jīng)綜合治療2周后和4周后,濕疹患者外周血中IL-21m RNA和Bcl-6m RNA的表達水平均比治療前升高,且差異均有統(tǒng)計學(xué)意義,表明可以通過調(diào)控IL-21和Bcl-6兩個細(xì)胞因子的表達水平,對治療濕疹起到一定的作用。
【關(guān)鍵詞】：濕疹 白細(xì)胞介素-21 B細(xì)胞淋巴瘤-6 Tfh細(xì)胞 實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)綉?yīng) EASI評分
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R758.23
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 縮略語11-12
• 前言12-15
• 研究現(xiàn)狀、成果12-13
• 研究目的、方法13-15
• 對象和方法15-28
• 1.1 實驗組病例來源15
• 1.2 健康對照組15
• 1.3 診斷和分期標(biāo)準(zhǔn)15
• 1.4 病例排除標(biāo)準(zhǔn)15-17
• 1.5 濕疹患者治療方案17
• 1.6 濕疹面積及嚴(yán)重度評分標(biāo)準(zhǔn)17-18
• 1.7 主要試劑18-19
• 1.8 實驗器具與材料19
• 1.9 試劑的配制19-21
• 1.10 實驗器具的處理和準(zhǔn)備21
• 1.11 實驗儀器21-22
• 1.12 實驗方法和步驟22-27
• 1.12.1 超凈臺處理22
• 1.12.2 實驗所需的樣本采集以及相關(guān)處理22
• 1.12.3 全血總RNA的提取22-24
• 1.12.4 總RNA的測定24
• 1.12.5 逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)24-25
• 1.12.6 SYBR Green I實時熒光定量PCR25-26
• 1.12.7 PCR產(chǎn)物凝膠電泳26-27
• 1.13 臨床資料及實驗室檢查27
• 1.14 統(tǒng)計學(xué)方法27-28
• 實驗結(jié)果28-35
• 2.1 總RNA純度的檢測28
• 2.2 總RNA完整性的檢測28
• 2.3 基因的相對定量方法及分析28
• 2.4 GAPDH、IL-21、Bcl-6 擴增產(chǎn)物鑒定28-32
• 2.4.1 GAPDH、IL-21、Bcl-6 的PCR產(chǎn)物28
• 2.4.2 檢測擴增產(chǎn)物的特異性28-32
• 2.5 濕疹患者IL-21、Bcl-6 相對表達量的分析及與部分臨床指標(biāo)的相關(guān)性分析（表 10-表 15）32-35
• 討論35-46
• 3.1 遺傳因素和外界環(huán)境因素與濕疹發(fā)病機制的相關(guān)研究35-36
• 3.2 CD4+T細(xì)胞亞群功能失衡與濕疹發(fā)病機制的相關(guān)研究36-37
• 3.3 Tfh細(xì)胞的相關(guān)功能分子IL-21 和Bcl-6 與濕疹37-46
• 3.3.1 IL-21 在濕疹中的作用機制38-41
• 3.3.2 Bcl-6 在濕疹中的作用機制41-43
• 3.3.3 IL-21、Bcl-6 與濕疹43-46
• 結(jié)論46-47
• 參考文獻47-54
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明54-55
• 綜述 Tfh細(xì)胞在相關(guān)疾病中的研究進展55-72
• 綜述參考文獻65-72
• 致謝72-74
• 個人簡歷74

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本文編號：700406