本文關(guān)鍵詞：負(fù)載順鉑金納米粒子抗惡性黑素瘤的體內(nèi)外效應(yīng)

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【摘要】：惡性黑素瘤起源于黑素細(xì)胞,是一種惡性度極高的皮膚腫瘤。轉(zhuǎn)移黑素瘤患者的平均存活時(shí)間只有6-10個(gè)月,10年生存率不到10%。治療轉(zhuǎn)移性黑素瘤的方法有化療、放療、免疫治療和靶向治療等,但目前的效果不理想,主要原因是藥物毒副作用大、藥物難以到達(dá)腫瘤部位和耐藥性,療效不顯著。順鉑(cisplatin)在上世紀(jì)70年代就被發(fā)現(xiàn)可以抑制腫瘤細(xì)胞的生長(zhǎng),現(xiàn)在廣泛應(yīng)用于晚期腫瘤包括黑素瘤的治療,但副作用很大。眾所周知,腫瘤組織中存在“增強(qiáng)滲透和保留(EPR)效應(yīng)”和酸性環(huán)境。金納米粒子(AuNP)可作為小分子藥物的運(yùn)載載體粒子,使抗癌藥物到達(dá)特定的腫瘤部位發(fā)揮作用；由于EPR效應(yīng),負(fù)載藥物的金納米粒子可以在腫瘤內(nèi)進(jìn)行選擇性積累,提高藥物的治療效果。同時(shí),腫瘤酸性微環(huán)境也為藥物的可調(diào)控釋放提供了前提基礎(chǔ),減少藥物毒副作用�；谏鲜鰞�(yōu)勢(shì),我們課題組設(shè)計(jì)制備出具有pH敏感性的、負(fù)載順鉑的金納米粒子,體內(nèi)外觀察該納米粒子治療惡性黑素瘤的效果。 目的：設(shè)計(jì)制備出具有pH敏感性的、負(fù)載順鉑的金納米粒子,探討其在體外實(shí)驗(yàn)中對(duì)人惡性黑素瘤M14細(xì)胞的殺傷作用,以及在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中對(duì)黑素瘤裸鼠移植瘤的抑制效應(yīng)。 方法：1.制備Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子：用種子生長(zhǎng)法合成金納米粒子,并將其PNIPAm-PEG化,成功鏈接順鉑,合成Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子。通過(guò)透射電鏡(TEM)、紫外分光光度計(jì)、電感耦合等離子體質(zhì)譜(ICP-MS)等表征了金納米粒子(AuNP)和Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子的尺寸和形態(tài)、吸收光譜及檢測(cè)了Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子中順鉑的濃度； 2.體外實(shí)驗(yàn)：先將少量異硫氰酸熒光素(FITC)熒光探針偶聯(lián)到納米粒子表面的PNIPAm末端,用熒光顯微鏡在體外觀察黑素瘤細(xì)胞(M14)攝取Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子的情況；通過(guò)TEM進(jìn)一步觀察Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子在M14細(xì)胞的胞內(nèi)分布；并用MTT檢測(cè)了Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子對(duì)M14細(xì)胞的毒性作用： 3.體內(nèi)實(shí)驗(yàn)：建立人黑素瘤裸鼠移植瘤模型；通過(guò)從移植瘤內(nèi)注射Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子20天,記錄移植瘤的生長(zhǎng)過(guò)程,測(cè)量移植瘤的體積、重量,在此基礎(chǔ)上得到裸鼠的生存曲線(xiàn)和監(jiān)測(cè)裸鼠體重；觀察不同治療組裸鼠的主要器官和移植瘤組織學(xué)改變；通過(guò)TEM觀察Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子在移植瘤細(xì)胞內(nèi)的分布。 結(jié)果：1.AuNP和Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子分散性好,AuNP直徑為8.0±0.8nm, Au-PNIPAm-PEG-cisplatin中順鉑的濃度為100.55μM； 2. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin進(jìn)入M14細(xì)胞后,主要分布在胞漿、胞內(nèi)體或溶酶體；與M14細(xì)胞作用48h和72h時(shí),Au-PNIPAm-PEG-cisplatin的1C50是游離順鉑的1.7倍和1.5倍,未載順鉑的Au-PNIPAm-PEG對(duì)M14細(xì)胞沒(méi)有毒性； 3. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子組和游離順鉑抑瘤率分別為76.29%和66.41%；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子組荷瘤裸鼠存活時(shí)間長(zhǎng)于生理鹽水組和無(wú)順鉑納米粒子組；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子組的病理組織顯示移植的黑素瘤無(wú)轉(zhuǎn)移；Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子主要分布于移植瘤細(xì)胞的胞內(nèi)體。 結(jié)論：1. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin能成功攜帶順鉑； 2. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子比游離順鉑更能抑制M14細(xì)胞的生長(zhǎng)； 3. Au-PNIPAm-PEG-cisplatin納米粒子能抑制黑素瘤生長(zhǎng)和轉(zhuǎn)移,延長(zhǎng)黑素瘤荷瘤裸鼠的生存時(shí)間。
【關(guān)鍵詞】：惡性黑素瘤 順鉑 金納米 pH敏感性
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 中英文單詞對(duì)照6-9
• 中文摘要9-11
• Abstract11-14
• 前言14-19
• 參考文獻(xiàn)16-19
• 第一部分 負(fù)載順鉑金納米粒子的制備及表征19-27
• 主要儀器和試劑19-20
• 實(shí)驗(yàn)方法20-22
• 結(jié)果22-24
• 討論24-25
• 小結(jié)25
• 參考文獻(xiàn)25-27
• 第二部分 負(fù)載順鉑金納米粒子作用于惡性黑素瘤M14細(xì)胞的體外研究27-45
• 主要儀器和試劑27-28
• 實(shí)驗(yàn)方法28-34
• 結(jié)果34-40
• 討論40-42
• 小結(jié)42-43
• 參考文獻(xiàn)43-45
• 第三部分 負(fù)載順鉑金納米粒子抗惡性黑素瘤的體內(nèi)研究45-68
• 主要儀器和試劑45
• 實(shí)驗(yàn)方法45-49
• 結(jié)果49-63
• 討論63-66
• 小結(jié)66-67
• 參考文獻(xiàn)67-68
• 全文總結(jié)68-70
• 綜述 納米技術(shù)在惡性黑素瘤治療中的應(yīng)用70-93
• 參考文獻(xiàn)84-93
• 致謝93-94
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表論文目錄94

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 叢林海;金納米鏈及Anti-EGFR/Au共軛物近紅外熱療對(duì)人喉癌Hep-2細(xì)胞凋亡作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

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本文編號(hào)：659777