本文關鍵詞：NTSR1拮抗劑SR48692對黑色素瘤細胞增殖、凋亡的影響

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【摘要】：目的：惡性黑色素瘤(malignant melanoma，MM)是起源于神經(jīng)嵴黑色素細胞的高度惡性腫瘤，易轉移，預后差。近年來，我國惡性黑色素瘤發(fā)病率迅速增長。多數(shù)早期患者能夠通過手術得到治愈，但對于中晚期患者，標準化療效果欠佳，因此探索高效低毒的新方法尤為需要。神經(jīng)降壓素(neurotensin,NT)是由13個氨基酸構成的單鏈多肽,主要通過神經(jīng)內分泌和激素作用調節(jié)胃腸道消化功能,近些年研究證明NT能促進部分腫瘤細胞的增殖。神經(jīng)降壓素受體1（NT receptor subtype1，NTSR1）是與G蛋白偶聯(lián)的NT的高親和力受體，通過與NT特異性結合介導NT的多種生物學作用。有研究發(fā)現(xiàn)NT和NTSR1在部分腫瘤組織和腫瘤細胞中的表達顯著高于正常組織，提示其在腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起了重要作用。研究證明NTSR1競爭性拮抗劑SR48692可特異性阻斷NT與NTSR1的結合，進而抑制NT的促腫瘤生長作用，因此NT/NTSR1可能成為新的腫瘤診斷指標和治療靶點，SR48692有望成為新型腫瘤靶向治療藥物。本研究檢測NTSR1在A375黑色素瘤細胞中的表達情況并探討其表達意義；觀察SR48692對人A375惡性黑色素瘤細胞增殖、周期、凋亡的影響，探索SR48692對軟瓊脂克隆形成和荷瘤小鼠體內腫瘤生長的抑制情況，為黑色素瘤尋找新的診斷指標和有效治療藥物。 方法： 1應用RT-PCR、Western blot和NTSR1免疫熒光檢測A375黑色素瘤細胞中NTSR1的表達情況； 2采用細胞計數(shù)法、MTT（四甲基偶氮唑藍）比色法檢測不同濃度的SR48692（5μmol/L、10μmol/L）在24h、48h、72h、96h四個時間點對人黑色素瘤細胞增殖抑制作用，同時應用BrdU免疫熒光對SR48692抑制A375細胞增殖情況進行分析； 3應用PI單染流式細胞分析檢測SR48692對細胞周期的影響；通過Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞分析和Hoechst33258染色驗證SR48692是否能誘導黑色素瘤細胞凋亡; 4軟瓊脂克隆形成分析和小鼠體內成瘤實驗驗證SR48692是否能抑制人A375黑色素瘤細胞成瘤。 結果： 1通過RT-PCR、Western blot和NTSR1免疫熒光染色方法均證實NTSR1在人A375黑色素瘤細胞系中顯著表達。 2細胞計數(shù)和MTT結果均顯示SR48692能抑制A375細胞增殖，呈現(xiàn)明顯的濃度（5μmol/L、10μmol/L）依賴效應關系；BrdU免疫熒光染色進一步證實，與對照組（26.07±2.59%）相比，SR48692處理組BrdU陽性細胞百分比顯著降低（7.55±2.76%，P=0.000）。 3PI單染流式細胞分析顯示：與對照組相比，SR48692處理組細胞周期S期和G2/M期比例顯著增加，而G0/G1期細胞所占比例顯著降低。通過細胞形態(tài)學觀察、Hoechst33258染色發(fā)現(xiàn)SR48692處理組出現(xiàn)明顯的凋亡形態(tài)改變，PI單染流式細胞分析顯示SR48692處理組呈現(xiàn)明顯的凋亡峰；并且Annexin V-FITC/PI雙染流式細胞分析顯示與對照相比(7.35±0.64%)，SR48692處理組凋亡細胞百分比(63.24±1.26%，P=0.000)顯著增加。 4軟瓊脂克隆形成實驗顯示與對照組（55.67±9.01）相比，SR48692處理組克隆形成數(shù)顯著降低(24.33±5.86，P=0.005）；黑色素瘤細胞體內異種移植NOD/SCID小鼠模型的研究結果顯示SR48692治療組的腫瘤體積和平均瘤重（0.117+0.023g）顯著低于對照組(0.243+0.022g，，P0.05)。 結論：本研究發(fā)現(xiàn)在黑色素瘤細胞系中NTSR1顯著表達，表明NT/NTSR1通路在A375黑色素瘤細胞系被激活.本實驗通過體內外研究證明SR48692可以通過誘導A375細胞凋亡及S期、G2/M期阻滯顯著抑制細胞增殖,同時抑制細胞克隆形成及小鼠體內成瘤�；赟R48692對黑色素瘤細胞如此顯著的抑制作用，SR48692是一種新的很有潛力的靶向治療黑色素瘤的候選藥物。
【關鍵詞】：惡性黑色素瘤 神經(jīng)降壓素 神經(jīng)降壓素受體1 SR48692 細胞增殖 凋亡
【學位授予單位】：河北醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 摘要4-6
• ABSTRACT6-9
• 前言9-10
• 材料與方法10-21
• 結果21-24
• 附圖24-33
• 附表33-35
• 討論35-37
• 結論37
• 參考文獻37-40
• 綜述 惡性黑色素瘤內科治療研究進展40-49
• 參考文獻45-49
• 致謝49-50
• 個人簡歷50

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 郭軍;;惡性黑色素瘤治療的新進展[J];臨床腫瘤學雜志;2007年12期

2 崔傳亮;遲志宏;袁香慶;斯璐;盛錫楠;郭軍;;重組人血管內皮抑制素聯(lián)合化療一線治療晚期黑色素瘤的Ⅱ期臨床研究[J];臨床腫瘤學雜志;2009年01期

本文編號：607588