發(fā)布時間：2017-07-20 17:21

  本文關(guān)鍵詞：C型凝集素受體DC-SIGN在特應(yīng)性皮炎發(fā)病中的作用機制研究

  更多相關(guān)文章： 特應(yīng)性皮炎 DC-SIGN受體 C型凝集素受體 過敏原 病原菌 樹突狀細胞 天然免疫 T細胞

【摘要】：特應(yīng)性皮炎(atopic dermatitis, AD)是一種具有代表性的過敏性疾病,一種常見的慢性、復(fù)發(fā)性、炎癥性皮膚病,主要表現(xiàn)為皮膚干燥、濕疹樣皮疹和頑固瘙癢。在過去的三十年間,該病的發(fā)病率快速攀升,目前該病在兒童中發(fā)病率已占到15-30%,在成人中的發(fā)病率也達到了2-10%[21。AD的發(fā)病機制涉及到很多因素,包括遺傳素質(zhì)、環(huán)境因素、免疫功能異常和皮膚屏障功能障礙等。天然免疫系統(tǒng)和適應(yīng)性免疫系統(tǒng)均參與AD發(fā)病,在病情急性發(fā)作及疾病持續(xù)發(fā)展中起重要的作用。AD患者因瘙癢反復(fù)搔抓加重皮膚屏障破壞,過敏原及病原微生物抗原更易透過皮膚產(chǎn)生過敏反應(yīng)。樹突狀細胞(dendritic cells, DCs)廣泛分布于皮膚和粘膜中,是機體功能最強的專職抗原遞呈細胞(Antigen presenting cells, APC),它能高效地攝取、加工處理和遞呈抗原。未成熟DC具有較強的遷移能力,成熟DC能有效激活初始T細胞,處于啟動、調(diào)控、并維持免疫應(yīng)答的中心環(huán)節(jié)。DCs識別和遞呈抗原是誘導(dǎo)獲得性免疫反應(yīng)發(fā)生的首要階段。近幾年來,人們認識到天然免疫系統(tǒng)的活化首先是通過抗原遞呈細胞表面的模式識別受體(pattern-recognition receptor, PRRs)來介導(dǎo)的。DCs表面表達多種PRRs,包括C凝集素受體(C-type lectin receptors, CLRs), Toll樣受體(Toll-like receptors)和核苷酸結(jié)合寡聚化蛋白受體(nucleotide-binding oligomerization domain proteins, NODs)等。其中,CLRs通過識別病原體或過敏原表面的“糖指紋”,來傳遞外源信號,活化免疫細胞。在眾多的CLRs中,DC-SIGN(DC-specific ICAM-grabbing non-integrin, DC-SIGN)日益受到人們的關(guān)注,主要表達于髓樣DC和巨噬細胞表面,作為DCs的模式識別和黏附受體,DC-SIGN可在DCs黏附遷移及炎癥反應(yīng)、激活天然T細胞及啟動免疫應(yīng)答,以及病原體與腫瘤的免疫逃逸等諸多方面發(fā)揮重要作用,并可能是DCs執(zhí)行和調(diào)控天然免疫與獲得性免疫反應(yīng)的一個重要的分子介導(dǎo)基礎(chǔ)。 DC-SIGN的胞外區(qū)糖識別域(CRDs)可識別結(jié)合特定的糖類抗原,如ManLAM和LewisX等。在生理條件下,DC-SIGN可通過促進DC捕獲病原體胞壁成分糖蛋白,調(diào)節(jié)DC抗原處理和遞呈功能。DC-SIGN與TLR家族在調(diào)節(jié)DC激活T細胞應(yīng)答中也存在串話,這種串話通過細胞內(nèi)信號分子改變而調(diào)節(jié)T細胞應(yīng)答產(chǎn)生免疫活化或免疫抑制,誘導(dǎo)免疫應(yīng)答趨于平衡,維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定。研究發(fā)現(xiàn),不同的病原體或抗原與DC-SIGN結(jié)合,誘導(dǎo)分泌的細胞因子不同,如胃幽門螺桿菌與DC-SIGN結(jié)合誘導(dǎo)Th2型細胞因子分泌增加；腦膜炎奈瑟氏菌變異體通過與DC-SIGN結(jié)合促進T細胞向Thl反應(yīng)；乳酸桿菌與DC-SIGN結(jié)合可誘導(dǎo)調(diào)節(jié)性T細胞的分化。在誘導(dǎo)耐受方面也發(fā)現(xiàn),妊娠期女性胎盤中DC-SIGN受體陽性的樹突狀細胞介導(dǎo)了母體免疫系統(tǒng)對胎兒抗原的免疫耐受；Huang等用嚴重食物過敏的小鼠動物模型研究發(fā)現(xiàn),Man51-BSA選擇性的作用于小鼠的腸道內(nèi)的表達SIGNR1(DC-SIGN的同源性受體)的固有層樹突狀(lamina propria dendritic cell, LPDC)細胞,參與誘導(dǎo)致敏食物口服耐受。以上的發(fā)現(xiàn)均支持DC-SIGN在免疫調(diào)節(jié)方面的重要角色,是一種免疫調(diào)節(jié)受體。 很多AD患者易感的病原微生物和過敏原都富含多糖結(jié)構(gòu),但是目前尚不清楚它們具體是如何通過DC-SIGN而活化DC,從而誘導(dǎo)特定型別T細胞免疫反應(yīng)的。因此,從以下幾方面研究DC-SIGN在AD患者的免疫功能異常中發(fā)揮的功能作用具有重要意義：①確定AD病人皮損處DC-SIGN表達情況；②富含多糖結(jié)構(gòu)的病原菌或過敏原與可溶性DC-SIGN受體和細胞膜表達的DC-SIGN受體結(jié)合情況；③塵螨被DC-SIGN識別、內(nèi)吞,及介導(dǎo)DCs活化后產(chǎn)生哪些細胞因子,從而誘導(dǎo)哪些型別的T細胞分化? 本研究針對以上方面進行了系統(tǒng)研究,期望發(fā)現(xiàn)DC-SIGN受體在AD的發(fā)病中的作用。首先,采集AD患者皮損,并以銀屑病皮損和正常人皮膚作為對照,免疫組化實驗方法檢測AD患者和對照組皮膚內(nèi)DC-SIGN表達差異情況。其次,驗證表達于DCs細胞上的DC-SIGN是否參與了變應(yīng)原及病原菌的識別、內(nèi)吞及遞呈?通過ELISA.流式細胞技術(shù)及激光共聚焦顯微鏡技術(shù)檢測數(shù)種過敏原與可溶性DC-SIGN蛋白及細胞表達的DC-SIGN受體的結(jié)合能力。再次,當(dāng)過敏原經(jīng)DC-SIGN通路誘導(dǎo)DCs活化成熟后,通過檢測DC細胞培養(yǎng)上清及DC細胞表面標(biāo)志,檢查DC細胞活化、成熟狀態(tài)。最后,將經(jīng)過敏原刺激的成熟DC細胞與初始T細胞共培養(yǎng),檢測過敏原通過DC-SIGN介導(dǎo)DCs活化后對指導(dǎo)T細胞極化作用的影響。 通過本實驗發(fā)現(xiàn),①DC-SIGN在AD患者皮膚內(nèi)表達量增高,推測DC-SIGN可能在特應(yīng)性皮炎的發(fā)病中起到一定的作用。②通過ELISA方法初步驗證過敏原／病原菌與可溶性DC-SIGN受體的結(jié)合能力及最佳結(jié)合濃度。③以構(gòu)建表達DC-SIGN受體的HEK293T細胞和體外誘導(dǎo)樹突狀細胞為模型模擬體內(nèi)情況,運用流式細胞技術(shù)和激光共聚焦顯微技術(shù)等方法驗證了DC-SIGN受體介導(dǎo)了過敏原的結(jié)合及內(nèi)吞。④塵螨刺激單核細胞誘導(dǎo)的樹突狀細胞(Monocyte derived dendritic cells, MDDCs)24h后,檢測比較DC-SIGN受體和／或Toll樣受體阻斷組的細胞培養(yǎng)上清前炎癥細胞因子及細胞表面標(biāo)志,發(fā)現(xiàn)DC-SIGN受體阻斷較其他組CD83表達受到抑制,培養(yǎng)上清中腫瘤壞死因子TNF-α和IL-6表達量降低,故得出DCs可通過DC-SIGN受體介導(dǎo)致活化和成熟。⑤最后將戶塵螨過敏原刺激的成熟DCs與初始T細胞共培養(yǎng),檢測發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)上清液中的IL-4和IL-22表達升高,間接證實了戶塵螨通過DC-SIGN刺激DCs細胞活化后,進一步誘導(dǎo)了初始T細胞向Th2和Th22型免疫反應(yīng)極化。 本研究課題對進一步闡明過敏性皮膚病的發(fā)病機制和干預(yù)環(huán)節(jié)提供了重要的理論依據(jù),也為開辟過敏性疾病發(fā)病機制研究的新領(lǐng)域和發(fā)展新的治療策略提供理論和實驗基礎(chǔ)。
【關(guān)鍵詞】：特應(yīng)性皮炎 DC-SIGN受體 C型凝集素受體 過敏原 病原菌 樹突狀細胞 天然免疫 T細胞
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R758.2
【目錄】：

• 英文縮寫一覽表7-9
• 全文摘要9-12
• Abstract12-15
• 第一部分：DC-SIGN在AD患者皮損中的表達研究15-25
• 摘要15-16
• 研究背景及研究目的16
• 材料與方法16-19
• 結(jié)果19-23
• 討論23-25
• 第二部分：DC-SIGN與變應(yīng)原/病原菌結(jié)合能力的研究25-66
• 第一節(jié) 單純皰疹病毒包膜糖蛋白gC合成及驗證25-39
• 摘要25-26
• 研究背景及研究目的26
• 材料與方法26-33
• 結(jié)果33-37
• 討論37-39
• 第二節(jié) 過敏原/病原菌與DC-SIGN受體體外結(jié)合能力研究39-44
• 摘要39
• 研究背景及研究目的39-40
• 材料與方法40-42
• 結(jié)果42-43
• 討論43-44
• 第三節(jié) DC-SIGN細胞表達模型的建立及功能研究44-58
• 摘要44-45
• 研究背景及研究目的45-46
• 材料與方法46-51
• 結(jié)果51-56
• 討論56-58
• 第四節(jié) 單核細胞誘導(dǎo)產(chǎn)生的樹突狀細胞對過敏原識別、攝取和內(nèi)吞能力研究58-66
• 摘要58
• 研究背景及研究目的58-59
• 材料與方法59-61
• 結(jié)果61-64
• 討論64-66
• 第三部分：DC-SIGN受體對樹突狀細胞活化成熟及對T細胞型別分化的影響66-80
• 摘要66
• 研究背景及研究目的66-68
• 材料與方法68-73
• 結(jié)果73-77
• 討論77-80
• 全文總結(jié)80-83
• 參考文獻83-89
• 論文相關(guān)綜述89-104
• 綜述一89-97
• 參考文獻94-97
• 綜述二97-104
• 參考文獻101-104
• 在讀期間已發(fā)表及待發(fā)表文章104-105
• 參加會議、發(fā)言和研究課題105-106
• 致謝106-107

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王靖雪;張小萍;賈正才;耿淼;吳玉章;;DC-SIGN熒光融合蛋白的構(gòu)建、表達和生物學(xué)功能初探[J];免疫學(xué)雜志;2006年04期

2 劉海波,曹雪濤;C型凝集素受體CLR與負性免疫調(diào)節(jié)[J];現(xiàn)代免疫學(xué);2005年04期

3 陳永熙;周同;趙亞鵬;吳開胤;陳楠;;DC-SIGN與免疫調(diào)節(jié)[J];生命科學(xué);2006年02期

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本文編號：569166