本文關(guān)鍵詞：銀屑病患者皮損間充質(zhì)干細(xì)胞分離、培養(yǎng)、鑒定及對(duì)T細(xì)胞增殖影響的研究

  更多相關(guān)文章： 銀屑病 間充質(zhì)干細(xì)胞 T淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子

【摘要】：目的：銀屑病患者皮損間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells, MSCs)在體外進(jìn)行分離、培養(yǎng)及鑒定,明確皮膚MSCs的培養(yǎng)體系,并研究銀屑病患者皮損MSCs對(duì)外周血T細(xì)胞增殖的影響、銀屑病患者皮損MSCs細(xì)胞因子水平及與病變程度的相關(guān)性。 方法：①分離、培養(yǎng)15例銀屑病患者皮損與15例健康人皮膚的單個(gè)核細(xì)胞,②流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞表面標(biāo)記物CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105及HLA-DR③經(jīng)相應(yīng)誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)細(xì)胞,并鑒定多向分化的細(xì)胞④采用MTT法,觀察MSCs對(duì)外周血T細(xì)胞增殖的影響⑤ELISA法檢測(cè)第3代皮膚單個(gè)核細(xì)胞培養(yǎng)上清液細(xì)胞因子水平⑥根據(jù)銀屑病皮損面積和嚴(yán)重程度的PAS I評(píng)分法,經(jīng)Pearson相關(guān)分析、評(píng)估細(xì)胞因子水平與銀屑病病變程度的相關(guān)性。 結(jié)果：①分離、培養(yǎng)MSCs:a.分割皮膚組織成小組織塊,置于2.5g/L DispaseII酶、37℃三小時(shí),分離真皮和表皮、棄表皮,將真皮切碎、吹打、過(guò)濾、離心、收集細(xì)胞,培養(yǎng)至5%C02、37℃培養(yǎng)箱中；b.待細(xì)胞貼壁達(dá)90%以上,傳至第3代；c.倒置顯微鏡下觀察兩組MSCs細(xì)胞形態(tài)相似；②流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs表面標(biāo)記物CD29、CD44、CD73、CD90及CD105均呈高表達(dá),而CD34、CD45及HLA-DR呈低表達(dá),證明培養(yǎng)MSCs有較高的純度；③誘導(dǎo)MSCs可向脂肪細(xì)胞、骨細(xì)胞及軟骨細(xì)胞分化④T細(xì)胞增殖活性檢測(cè)結(jié)果：銀屑病患者皮損及正常皮膚來(lái)源的MSCs對(duì)外周血T細(xì)胞增殖均有抑制作用(P0.05),而患者皮損MSCs的抑制能力減弱(P0.05)；⑤與健康人比較,銀屑病患者皮損MSCs上清液中IL-11顯著增高,而IL-6、HGF降低(P0.05)；⑥銀屑病患者皮損MSCs細(xì)胞因子水平與PAS I評(píng)分無(wú)相關(guān)性。 結(jié)論：①成功分離、培養(yǎng)、鑒定皮膚MSCs,建立了皮膚MSCs的培養(yǎng)體系,為培養(yǎng)皮膚MSCs提供正確、有效的方法；②銀屑病患者皮損MSCs對(duì)外周血T細(xì)胞增殖的抑制能力減弱；③銀屑病患者皮損MSCs對(duì)外周血T細(xì)胞增殖的抑制能力減弱可能是通過(guò)細(xì)胞因子分泌水平異常引起的,而細(xì)胞因子水平與PASI評(píng)分無(wú)相關(guān)性,揭示銀屑病患者皮損MSCs異�？赡軈⑴c銀屑病的發(fā)病。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 間充質(zhì)干細(xì)胞 T淋巴細(xì)胞 細(xì)胞因子
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類(lèi)號(hào)】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要5-7
• ABSTRACT7-9
• 縮略詞表9-10
• 前言10-12
• 第一章 材料與方法12-20
• 1.1 標(biāo)本來(lái)源12
• 1.2 主要試劑12-13
• 1.3 主要儀器設(shè)備13-14
• 1.4 實(shí)驗(yàn)方法14-19
• 1.5 統(tǒng)計(jì)處理19-20
• 第二章 實(shí)驗(yàn)結(jié)果20-23
• 2.1 MSCs培養(yǎng)形態(tài)學(xué)的觀察和細(xì)胞的鑒定20-21
• 2.2 T細(xì)胞增殖活性檢測(cè)結(jié)果(見(jiàn)表1)21
• 2.3 ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子結(jié)果(見(jiàn)表2)21
• 2.4 PEARSON相關(guān)分析患者細(xì)胞因子水平與病變嚴(yán)重程度21-23
• 第三章 討論23-26
• 第四章 結(jié)論26-27
• 參考文獻(xiàn)27-30
• 附圖30-33
• 綜述33-44
• 參考文獻(xiàn)40-44
• 致謝44-45
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷45

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：568159