本文關(guān)鍵詞：鈣泊三醇對人角質(zhì)形成細(xì)胞S100A8表達(dá)的影響

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【摘要】：一.研究背景及目的 銀屑病是一類常見的慢性炎癥性皮膚病,皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞的異常增殖和分化是銀屑病發(fā)病的重要環(huán)節(jié)。人體皮膚是維生素D的合成場所,維生素D及其類似物鈣泊三醇也可以作用于角質(zhì)形成細(xì)胞,調(diào)節(jié)細(xì)胞增殖、分化和凋亡。同時在角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi),抗菌肽S100A7、S100A8、S100A9可以與IL-17、IL-1、TNF-α等炎癥因子相互促進(jìn),引起細(xì)胞異常增殖與分化,導(dǎo)致銀屑病發(fā)�。灰延醒芯孔C實(shí)維生素D可以通過拮抗S100A7表達(dá)減輕皮膚炎癥反應(yīng),從而治療銀屑病。基于此,維生素D及其類似物是否可能通過影響角質(zhì)形成細(xì)胞S100A8的表達(dá)而參與銀屑病的病理生理過程?本課題以體外培養(yǎng)的永生化人角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT細(xì)胞系為對象,通過實(shí)時定量PCR的方法研究鈣泊三醇對細(xì)胞內(nèi)S100A8蛋白表達(dá)的影響。 二.研究方法 (1) HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)：使用含10%FBS及抗生素的MEM-EBSS培養(yǎng)基常規(guī)體外培養(yǎng)HaCaT細(xì)胞并傳代。 (2) TNF-α與鈣泊三醇對HaCaT細(xì)胞的干預(yù)：最后一次傳代后細(xì)胞融合達(dá)80-90%時分為四組,空白對照組不加入任何藥物干預(yù),TNF-α組加入100ng/ml TNF-α,鈣泊三醇組加入10弓M～10-9M濃度梯度的鈣泊三醇,鈣泊三醇+TNF-α組在100ng/ml TNF-α的基礎(chǔ)上再加入10-5M～10-9M鈣泊三醇,上述細(xì)胞共同孵育24h。 (3) HaCaT細(xì)胞內(nèi)S100A8表達(dá)水平檢測：細(xì)胞成分提取總RNA,反轉(zhuǎn)錄為cDNA,采用RT-PCR方法擴(kuò)增目的基因S100A8及內(nèi)參β-actin片段并行1%瓊脂糖凝膠電泳；使用同樣的cDNA及引物通過實(shí)時定量PCR的方法擴(kuò)目的基因S100A8及內(nèi)參β-actin片段,用2“△C‘法計(jì)算各樣本S100A8相對表達(dá)量,并用單因素方差分析的統(tǒng)計(jì)學(xué)方法比較各組間S100A8表達(dá)的差異。 三.研究結(jié)果 (1)S100A8擴(kuò)增產(chǎn)物為長度250bp左右的單一片段,β-actin擴(kuò)增產(chǎn)物為長度130bp左右的單一片段； (2)100ng/ml TNF-α處理體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞24h后,S100A8表達(dá)較空白對照上調(diào)19.62倍(P0.01)； (3)10-7M、10-8M鈣泊三醇處理細(xì)胞24h后,S100A8表達(dá)分別較空白對照上調(diào)5.029、2.848倍(P0.01)； (4)10-5M、10-6M及10-9M鈣泊三醇處理細(xì)胞24h后,S100A8表達(dá)較空白對照無明顯變化(P0.05)； (5)10-5M鈣泊三醇與100ng/ml TNF-α共同處理體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞24h后,S100A8表達(dá)下調(diào)為單獨(dú)使用TNF-α?xí)r的0.5951倍(P0.05)： (6)10-7M鈣泊三醇與100ng/ml TNF-α共同處理細(xì)胞24h后,S100A8表達(dá)較單獨(dú)使用TNF-α?xí)r上調(diào)1.873倍(P0.01)； (7)10-6M、10-8M及10-9M鈣泊三醇與100ng/ml TNF-α共同處理細(xì)胞24h后,S100A8表達(dá)較單獨(dú)使用TNF-α無明顯變化(P0.05)。 四.結(jié)論 (1)TNF-α可以誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞內(nèi)高度表達(dá)S100A8,證實(shí)其可以與IL-1、IL-8、IL-17等炎癥因子一起,通過刺激角質(zhì)形成細(xì)胞高度表達(dá)S100A8,影響角質(zhì)細(xì)胞增殖與分化,加重皮膚炎癥反應(yīng),導(dǎo)致銀屑病發(fā)病。 (2)鈣泊三醇可能通過影響S100A8表達(dá)雙向調(diào)節(jié)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖：高濃度(約10-5M)鈣泊三醇下調(diào)S100A8表達(dá),發(fā)揮抑制細(xì)胞增殖、促進(jìn)細(xì)胞凋亡的作用,并且可以打破S100A8與TNF-α等炎癥因子的相互作用,減輕皮膚炎癥反應(yīng),治療銀屑病皮損；低濃度(約10-7～108M)鈣泊三醇上調(diào)S100A8表達(dá),主要發(fā)揮促進(jìn)細(xì)胞增殖的作用。
【關(guān)鍵詞】：銀屑病 角質(zhì)形成細(xì)胞 鈣泊三醇 S100A8 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-8
• 前言8-10
• 引言10
• 材料與方法10-19
• 一.實(shí)驗(yàn)材料、試劑及儀器10-12
• 二.實(shí)驗(yàn)方法12-19
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果19-29
• 討論29-36
• 結(jié)論36-37
• 中英文縮略詞表37-38
• 參考文獻(xiàn)38-41
• 綜述1：維生素D及其類似物在銀屑病中對角質(zhì)形成細(xì)胞的影響41-48
• 參考文獻(xiàn)45-48
• 綜述2：IL-22在銀屑病發(fā)病過程中的作用及相關(guān)治療學(xué)進(jìn)展48-54
• 參考文獻(xiàn)52-54
• 作者基本情況54-55
• 致謝55-56

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 Benoit S.;Toksoy A.;Ahlmann M. ;M. Goebeler;李曉莉;;血清鈣結(jié)合S100蛋白A8和A9的水平升高可以反映銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞的異常分化和疾病的活動性[J];世界核心醫(yī)學(xué)期刊文摘(皮膚病學(xué)分冊);2006年09期

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本文編號：562418