本文關鍵詞：Hsa-miR-30e、Hsa-miR-192對HaCaT細胞表達血管內(nèi)皮生長因子的調(diào)控

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【摘要】：目的：探討人工構(gòu)建的hsa-miR-30e和hsa-miR-192條microRNA對人HaCaT細胞表達血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)的調(diào)控作用,預測hsa-miR-30e和hsa-miR-192在銀屑病領域的應用前景。 方法：培養(yǎng)人永生角質(zhì)形成細胞(HaCaT細胞株),培養(yǎng)完成后進行細胞鋪板,本次實驗設有hsa-miR-30e模擬物組、hsa-miR-30e抑制物組、hsa-miR-192模擬物組、hsa-miR-192抑制物組、模擬物陰性對照組、抑制物陰性對照組和空白對照組共7組,根據(jù)需要做好復孔,然后加入轉(zhuǎn)染試劑進行轉(zhuǎn)染,再用MTT法檢測HaCaT細胞增殖活性和細胞轉(zhuǎn)染的結(jié)果,實時熒光定量PCR(qRT-PCR)檢測轉(zhuǎn)染細胞中VEGF基因的mRNA水平,ELISA法觀察hsa-miR-30e和hsa-miR-192對VEGF蛋白表達水平的調(diào)控效應。 結(jié)果：MTT實驗結(jié)果顯示hsa-miR-30e模擬物、hsa-miR-30e抑制物、hsa-miR-192模擬物、hsa-miR-192抑制物、模擬物陰性對照和抑制物陰性對照六組24h、48h、72h的細胞增殖活性有統(tǒng)計學意義(P0.05),并且可在鏡下觀察到細胞生長狀態(tài)良好,代表轉(zhuǎn)染效果也十分良好。又可看出隨著時間的推移細胞增殖抑制率逐漸升高,到72h時達到最高,說明轉(zhuǎn)染率在72h最高。在24h時,可看出hsa-miR-192模擬物和hsa-miR-192抑制物兩組間的細胞增殖抑制率沒有明顯差別,猜測可能兩者間差異不大,其它各組間細胞增殖抑制率有統(tǒng)計學意義。48h時,hsa-miR-30e模擬物和hsa-miR-30e抑制物兩組和空白對照組相比細胞增殖抑制率有統(tǒng)計學意義,但兩者之間P0.05。但hsa-miR-192模擬物、hsa-miR-192抑制物和空白對照組各組間細胞增殖抑制率均P0.05。可能隨著時間的推移,轉(zhuǎn)染的效果會更加明顯,組間會有些許的波動。72h時,只有hsa-miR-30e模擬物和hsa-miR-30e抑制物、hsa-miR-192模擬物和hsa-miR-192抑制物相比較細胞增殖抑制率沒有統(tǒng)計學意義,其它各組間均有統(tǒng)計學意義。推測隨著細胞增殖抑制率達到最高,轉(zhuǎn)染率也達到最高,效果最明顯,細胞也趨于穩(wěn)定,達到最佳狀態(tài),促使各組間差異體現(xiàn)明顯。qRT-PCR結(jié)果顯示hsa-miR-30e模擬物組的2-ΔΔct均值為(6.04±0.07),說明提高了hsa-miR-30e豐度的VEGF基因的mRNA的表達高于正常的VEGF基因的mRNA的表達的(6.04士0.07)倍。hsa-miR-192模擬物和hsa-miR-192抑制物的VEGF基因的mRNA的表達沒有檢測出來,推測可能此條miRNAs不通過VEGF信號通路調(diào)控。ELISA結(jié)果顯示hsa-miR-30e模擬物、hsa-miR-30e抑制物、模擬物陰性對照、抑制物陰性對照和空白對照組各組間的VEGF蛋白表達水平均有統(tǒng)計學意義,進一步說明hsa-miR-30e在銀屑病患者中通過VEGF信號通路表達上調(diào)。hsa-miR-192模擬物、hsa-miR-192抑制物、模擬物陰性對照、抑制物陰性對照和空白對照組各組間的VEGF蛋白表達水平?jīng)]有統(tǒng)計學意義。進一步說明可能此條miRNAs不通過VEGF信號通路調(diào)控。 結(jié)論：銀屑病是一種遺傳基因異常性疾病,轉(zhuǎn)錄水平上的hsa-miR-30e可靶向負調(diào)控大量nRNA,而這個被調(diào)控的mRNA與其它nRNA又存在錯綜復雜的相互影響和作用,共同形成網(wǎng)絡式的調(diào)節(jié)結(jié)構(gòu)通過多種途徑來參與銀屑病的發(fā)生。
【關鍵詞】：銀屑病 miRNA HaCaT細胞 VEGF 轉(zhuǎn)染
【學位授予單位】：天津醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2013
【分類號】：R758.63
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 縮略語說明9-10
• 前言10-13
• 研究現(xiàn)狀、成果10-11
• 研究目的、方法11-13
• Hsa-miR-30e、Hsa-miR-192對HaCaT細胞表達血管內(nèi)皮生長因子的調(diào)控13-41
• 1 對象和方法13-25
• 1.1 細胞株13
• 1.2 主要試劑及儀器13-14
• 1.3 實驗方法14-25
• 2 結(jié)果25-34
• 2.1 MTT結(jié)果25-27
• 2.2 qRT-PCR結(jié)果27-30
• 2.3 ELISA結(jié)果30-34
• 3 討論34-41
• 結(jié)論41-42
• 參考文獻42-47
• 發(fā)表論文和參加科研情況說明47-48
• 附錄48-49
• 綜述49-68
• 綜述參考文獻60-68
• 致謝68

【參考文獻】

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本文編號：551857