本文關(guān)鍵詞：皮膚光老化中PcG蛋白對透明質(zhì)酸合成的調(diào)控作用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：皮膚老化包括自然老化和光輻射老化兩種形式，皮膚光輻射老化中紫外線是最重要的危險因素。慢性累積的紫外線輻射后，，可直接或間接地激活老化相關(guān)的分子信號通路，從而抑制膠原及透明質(zhì)酸的合成最終引起皮膚老化、皺紋形成等相關(guān)改變。多項報道從多方面已證實自然老化與光老化存在著共同的分子調(diào)控通路，因而可應(yīng)用紫外線照射模擬皮膚老化建立光老化模型。 皮膚老化時最重要的表現(xiàn)為皮膚皺紋的形成，皺紋形成的最主要原因是皮膚真皮層的膠原蛋白與透明質(zhì)酸合成量的減少，而在這個過程中成纖維細(xì)胞是最重要的細(xì)胞成分。它作為真皮內(nèi)的細(xì)胞外基質(zhì)支架的主要生產(chǎn)者，參與許多動態(tài)過程并與其它細(xì)胞相互作用調(diào)控各個細(xì)胞進(jìn)程的動態(tài)平衡，然而針對皮膚光老化時透明質(zhì)酸的合成調(diào)控機制有待更深一層的研究。 目前的研究成果表明PcG蛋白復(fù)合體是基因表觀調(diào)控中一組特殊轉(zhuǎn)錄抑制子，它通過對染色質(zhì)修飾來對靶基因發(fā)揮作用，并且參與了細(xì)胞老化的調(diào)控過程。但在皮膚老化的領(lǐng)域上尚無明確的研究報道，因而其是否是皮膚老化過程中的一個潛在的調(diào)控分子是一條全新未知的探索方向，本研究的目的在于探究在皮膚光老化過程中HSF（humanskinfibroblast，人皮膚成纖維細(xì)胞）和ESF（embryonalskin fibroblast，人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞）中PcG蛋白對透明質(zhì)酸的合成調(diào)控作用。 本實驗以人皮膚成纖維細(xì)胞和胚胎皮膚成纖維細(xì)胞為實驗對象，采用紫外線照射模擬建立光老化模型，應(yīng)用CCK8（Cell-countingkit8,細(xì)胞增殖實驗）、流式細(xì)胞儀檢測技術(shù)、ELISA（Enzyme-linkedimmunosorbentassay,酶聯(lián)免疫吸附實驗）和RT-PCR （Realtime-polymerasechainreaction,實時定量多聚酶鏈反應(yīng)）等技術(shù)觀察不同劑量紫外線照射細(xì)胞后不同時象的細(xì)胞增殖活性、細(xì)胞凋亡情況、透明質(zhì)酸合成的改變以及細(xì)胞老化相關(guān)基因的表達(dá)改變，意在探究紫外線輻射致皮膚光老化的機制、PcG蛋白對光老化中透明質(zhì)酸的合成調(diào)控作用及人皮膚成纖維細(xì)胞與胚胎皮膚成纖維細(xì)胞之間的差異。 一、紫外線對HSF及ESF細(xì)胞增殖活性的影響： 應(yīng)用ZF-1三用紫外分析儀，選擇365nm波長，應(yīng)用紫外線輻照計實時檢測紫外輻照度，選擇0,1,2,4,8J/cm2共五個照射劑量照射細(xì)胞，并于照射后0,12h,24h三個時間點使用CCK-8試劑盒分別檢測照射后的HSF及ESF的細(xì)胞增殖活性，結(jié)果顯示除小劑量紫外線可促進(jìn)HSF細(xì)胞增殖外，不同劑量的紫外線照射均抑制HSF及ESF細(xì)胞的細(xì)胞增殖，且劑量越大，抑制作用越明顯。同時，紫外線對ESF細(xì)胞的損傷作用較HSF更強，但隨時間的增加ESF表現(xiàn)出較HSF更強的損傷修復(fù)能力。結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 二、紫外線對HSF及ESF細(xì)胞凋亡的影響： 應(yīng)用ZF-1三用紫外分析儀，選擇365nm波長，應(yīng)用紫外線輻照計實時檢測紫外輻照度，選擇0,1,4,8J/cm2共四個照射劑量照射細(xì)胞，并于照射后0h,12h,24h三個時間點使用流式細(xì)胞儀檢測照射后的HSF及ESF的細(xì)胞凋亡情況，結(jié)果顯示HSF在中劑量紫外線照射時細(xì)胞凋亡比例增加，在大劑量紫外線照射時細(xì)胞凋亡比例及死亡細(xì)胞比例均減少；ESF在大劑量紫照射時凋亡細(xì)胞比例及死亡細(xì)胞比例均增加。結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 三、紫外線對HSF及ESF的透明質(zhì)酸合成的影響： 1、采取與流式檢測時相同的照射條件和劑量分組，于照射后12h、24h兩個時間點應(yīng)用ELISA法測定HA的含量。結(jié)果顯示除小劑量紫外線可促進(jìn)ESF中HA的合成分泌外，不同劑量紫外線照射均抑制ESF及HSF中HA的合成。 2、同樣的照射條件和劑量分組，于照射后12h應(yīng)用實時定量PCR技術(shù)檢測照射后的HSF及ESF細(xì)胞內(nèi)的三種透明質(zhì)酸合成酶（HAS1、HAS2、HAS3）及透明質(zhì)酸分解酶（HYAL1、HYAL2）的mRNA表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSF的HAS2、HAS3、HAYL1基因在不同劑量照射組中表達(dá)均上調(diào)，HAS1基因在各個劑量中表達(dá)均下調(diào)，HYAL2基因在小劑量及中劑量組表達(dá)上調(diào)，而大劑量組表達(dá)下調(diào)。ESF的HAS2、HAS3基因在不同劑量照射組中表達(dá)均下調(diào)，HAYL1基因在不同劑量照射組中表達(dá)均上調(diào)，HYAL2基因在小劑量表達(dá)上調(diào)，而在中劑量組及大劑量組中表達(dá)下調(diào)。結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 四、紫外線照射時HSF及ESF中PcG蛋白基因表達(dá)的變化： 采取相同的照射條件和劑量分組，于照射后12h對兩種細(xì)胞的PcG蛋白基因進(jìn)行實時定量PCR檢測，檢測照射后的HSF及ESF細(xì)胞內(nèi)的PcG蛋白的mRNA表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)HSF的PcG蛋白基因在中劑量紫外線照射下表達(dá)均下調(diào)，在大劑量紫外線照射下表達(dá)均上調(diào)。ESF的PCG蛋白基因在不同劑量紫外線照射下表達(dá)均下調(diào)。結(jié)果具有統(tǒng)計學(xué)意義差異（P0.05）。 這些結(jié)果提示紫外線輻射皮膚光老化過程中PcG蛋白可能參與了透明質(zhì)酸合成的調(diào)控，且在人皮膚成纖維細(xì)胞及人胚胎成纖維細(xì)胞中的調(diào)控作用存在差異。這些實驗結(jié)果為研究皮膚光老化機制提供了重要線索和新的探索方向，但其具體的調(diào)控機制有待于更進(jìn)一步的研究驗證。
【關(guān)鍵詞】：皮膚老化 PcG蛋白 紫外線 人皮膚成纖維細(xì)胞 人胚胎皮膚成纖維細(xì)胞 透明質(zhì)酸
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R758.1
【目錄】：

• 前言4-5
• 中文摘要5-8
• Abstract8-13
• 縮略語表13-15
• 第1章 緒論15-24
• 1.1 老化的概述15
• 1.1.1 老化的定義15
• 1.1.2 皮膚老化15
• 1.2 紫外線照射致皮膚老化15-18
• 1.2.1 紫外線的組成及對皮膚的輻射損傷15-16
• 1.2.2 紫外線致皮膚光老化時活化的信號通路16-18
• 1.3 紫外線光老化過程中透明質(zhì)酸的作用及改變18-20
• 1.3.1 透明質(zhì)酸18
• 1.3.2 透明質(zhì)酸合成酶18-19
• 1.3.3 人皮膚成纖維細(xì)胞與胚胎皮膚成纖維細(xì)胞的透明質(zhì)酸合成存在差異19
• 1.3.4 透明質(zhì)酸合成調(diào)控分子通路19-20
• 1.4 PCG 蛋白復(fù)合體20-24
• 1.4.1 PcG 蛋白的組成20
• 1.4.2 PRC2 蛋白復(fù)合體20-21
• 1.4.3 PRC1 蛋白復(fù)合體21-22
• 1.4.4 PcG 蛋白復(fù)合體與細(xì)胞老化的關(guān)系22-23
• 1.4.5 PcG 蛋白復(fù)合體調(diào)控細(xì)胞老化的分子機制23-24
• 第2章 實驗方法24-35
• 2.1 材料和儀器24-26
• 2.1.1 主要試劑24
• 2.1.2 主要儀器24-25
• 2.1.3 主要耗材25-26
• 2.2 實驗方法26-35
• 2.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)與傳代26-27
• 2.2.2 紫外線照射預(yù)實驗27-28
• 2.2.3 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞增殖活性的影響28-29
• 2.2.4 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞凋亡的影響29-30
• 2.2.5 紫外線對 HSF 及 ESF 的透明質(zhì)酸合成的影響30-33
• 2.2.6 紫外線照射時 HSF 及 ESF 中 PcG 蛋白基因表達(dá)的變化33-35
• 第3章 結(jié)果35-48
• 3.1 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞增殖活性的影響35-37
• 3.2 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞凋亡的影響37-42
• 3.3 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞透明質(zhì)酸合成的影響42-46
• 3.4 紫外線照射時 HSF 及 ESF 中 PCG 蛋白基因表達(dá)的變化46-48
• 第4章 討論48-52
• 4.1 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞增殖活性的影響48-49
• 4.2 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞凋亡的影響49
• 4.3 紫外線對 HSF 及 ESF 細(xì)胞透明質(zhì)酸合成的影響49-50
• 4.4 紫外線照射時 HSF 及 ESF 中 PCG 蛋白基因表達(dá)的變化50-51
• 4.5 PCG 蛋白對 HA 合成的調(diào)控作用51-52
• 第5章 結(jié)論52-53
• 參考文獻(xiàn)53-65
• 導(dǎo)師及作者簡介65-66
• 作者簡介66-68
• 致謝68-69

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