發(fā)布時(shí)間：2025-01-07 02:33

　　目的:(1)觀察中藥單體三七總皂苷(PNS)對黑素細(xì)胞增殖活性、酪氨酸酶活性、黑素合成、自噬水平的影響。(2)利用高通量測序技術(shù)對兩種外泌體的miRNA表達(dá)譜進(jìn)行分析。(3)應(yīng)用角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞釋放的外泌體干預(yù)黑素細(xì)胞,觀察兩種干預(yù)條件下外泌體的內(nèi)化過程、黑素細(xì)胞的增殖情況、酪氨酸酶活性、黑素合成的差異。方法:(1)獲取來源于包皮的表皮黑素細(xì)胞懸液,傳代時(shí)進(jìn)行差別胰酶處理,獲得較為純凈的黑素細(xì)胞,接種在培養(yǎng)板中。分別用濃度為0μg/ml、10μg/ml、30μg/ml、60μg/ml、90μg/ml、120μg/ml的PNS處理黑素細(xì)胞,光鏡下觀察黑素細(xì)胞的生長情況和形態(tài),孵育24小時(shí)和48小時(shí)分別用多巴氧化法檢測酪氨酸酶活性、氫氧化鈉法檢測黑素含量、CCK-8法檢測細(xì)胞增殖率。選取中間濃度(60μg/ml),借助自噬水平檢測試劑盒檢測黑素細(xì)胞的自噬水平。(2)培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞用富集法換液,收集培養(yǎng)基,用exo Easy Maxi Kit試劑盒提取培養(yǎng)基中的外泌體,利用高通量測序,分析兩種外泌體的miRNA表達(dá)譜,主要關(guān)注miRNA差異表達(dá)分析,對差異表達(dá)的miRN...

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖1差別胰酶處理獲取較為純凈的黑素細(xì)胞

圖1差別胰酶處理獲取較為純凈的黑素細(xì)胞。A：原代培養(yǎng)的細(xì)胞，黑素細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞混雜（100×）；B：差別胰酶處理后獲得的二代細(xì)胞，絕大多數(shù)細(xì)胞是黑素細(xì)胞，幾乎沒有角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞。3.2實(shí)驗(yàn)組和對照組黑素細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察差別胰酶消化法獲得的較為純凈的黑....

圖3三七總皂苷對黑素細(xì)胞增殖率的影響

三七總皂苷和角質(zhì)形成細(xì)胞來源的外泌體對人表皮黑素細(xì)胞的作用實(shí)驗(yàn)一處理組，細(xì)胞增殖迅速，有成簇生長的趨勢，細(xì)胞普遍多樹突化（100×）。F：120μg/ml藥液處理組，細(xì)胞增殖較低濃度處理組低，細(xì)胞密度和對照組相似，黑素細(xì)胞有3-4個(gè)樹突，樹突更為伸展、細(xì)長。3.3實(shí)驗(yàn)組和對....

圖4三七總皂苷對黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性的影響

實(shí)驗(yàn)一三七總皂苷和角質(zhì)形成細(xì)胞來源的外泌體對人表皮黑素細(xì)胞的作用90μg/ml、120μg/ml）孵育，孵育24小時(shí)后檢測酪氨酸酶活性，獲得的數(shù)據(jù)與細(xì)胞增殖率的變化曲線相一致。結(jié)果顯示，與普通培養(yǎng)基培養(yǎng)的對照組相比，藥液處理明顯促進(jìn)了黑素細(xì)胞酪氨酸酶活性，并且這種促進(jìn)作用隨....

圖5三七總皂苷對黑素細(xì)胞黑素含量的影響

圖5三七總皂苷對黑素細(xì)胞黑素含量的影響。實(shí)驗(yàn)組黑素細(xì)胞黑素含量明顯高于對照組，并且黑素含量隨著給藥劑量增加呈上升趨勢，在藥物濃度60μg/ml時(shí)達(dá)到峰值。隨后黑素含量隨藥物濃度增加呈現(xiàn)下降趨勢。3.6實(shí)驗(yàn)組和對照組黑素細(xì)胞自噬水平的觀察較為純凈的黑素細(xì)胞以5000細(xì)....

本文編號：4024364