蛋白水解酶的水解過程對(duì)于正常的生理功能是必需的,包括正常的血管維持,血管的形成,凝塊的形成和溶解,骨的重塑以及排卵等。這些酶系統(tǒng)的上述作用同樣適用于癌細(xì)胞的生長(zhǎng)和遷移,通過降解基底膜以及細(xì)胞外基質(zhì),以利于細(xì)胞的遷移。降解胞外基質(zhì)的蛋白水解酶主要包括三種:基質(zhì)金屬蛋白酶,半胱氨酸蛋白酶以及絲氨酸蛋白酶。其中絲氨酸蛋白酶中的uPA系統(tǒng)起著重要的作用。 在uPA系統(tǒng)中,uPA/uPAR作用更為重要。以往的研究表明,uPA/uPAR在正常皮膚中無表達(dá),但在皮膚的腫瘤組織以及創(chuàng)傷后表達(dá)強(qiáng)烈。但以往的研究對(duì)uPA/uPAR在胚胎發(fā)育期的情況以及功能方面研究較少;在創(chuàng)傷愈合過程的早期,uPAR表達(dá)強(qiáng)烈,但其作用如何,以往文獻(xiàn)未見報(bào)道。 因此,本研究以u(píng)PA/uPAR為研究對(duì)象,首先,通過免疫組織化學(xué)以及原位雜交技術(shù)研究uPA/uPAR在胚胎發(fā)育期皮膚及毛囊的表達(dá)情況;由于人體研究的局限性,通過構(gòu)建含uPA ATF以及uPAR的綠色熒光蛋白,并分別轉(zhuǎn)染到小鼠永生化細(xì)胞株P(guān)am 212,分別檢測(cè)轉(zhuǎn)染后對(duì)細(xì)胞增殖遷移的影響;將構(gòu)建的綠色熒光蛋白經(jīng)注射、電穿孔后觀察對(duì)在體小鼠創(chuàng)傷愈合的影響。主要結(jié)果如下: ...

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【學(xué)位級(jí)別】：博士

【部分圖文】：

圖1：uPA/uPAR作用后功能模式圖

圖1：uPA/uPAR作用后功能模式圖Fig1:thefunctionofuPA/uPARinteractions以往對(duì)uPA/uPAR的研究，多注重于腫瘤方面。在正常人或動(dòng)物的皮膚中/uPAR的表達(dá)，但在腫瘤組織中，uPA/uPAR一直高表達(dá)，而且與預(yù)后嚴(yán)....

圖2-1:質(zhì)粒pEGFPC1-uPAATF的構(gòu)建Fig2-1:ConstructionoftherecombinantplasmidpEGFPC1-uPAATF

圖2-1:質(zhì)粒pEGFPC1-uPAATF的構(gòu)建Fig2-1:ConstructionoftherecombinantplasmidpEGFPC1-uPAATF4、將鑒定的質(zhì)粒用Lipofectamine2000轉(zhuǎn)染Pam212細(xì)胞株轉(zhuǎn)染步驟按....

圖2－2：uPAATF的PCR擴(kuò)增及其重組質(zhì)粒的酶切鑒定400bp400bp

第三軍醫(yī)大學(xué)博士學(xué)位論文結(jié)果(一)uPAATF的質(zhì)粒的擴(kuò)增和pEGFPC1-uPAATF質(zhì)粒的構(gòu)建將pET質(zhì)粒經(jīng)轉(zhuǎn)染細(xì)菌、擴(kuò)增、抽提后，PCR擴(kuò)增后，進(jìn)行通過雙酶切鑒定，分別用EcoRⅠ、BamHⅠ酶切，電泳發(fā)現(xiàn)兩0bp處。通過質(zhì)粒測(cè)序(5’端)比較，發(fā)現(xiàn)....

圖2-3：5’端質(zhì)粒pEGFPC1-uPAATF測(cè)序圖

31圖2-3：5’端質(zhì)粒pEGFPC1-uPAATF測(cè)序圖Fig2-3:ResultofpEGFPC1-uPAATF-5’sequencing

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