本課題將基因芯片技術用于性傳播疾病病原體診斷與檢測研究，制備了以熒 光標記多重不對稱PCR技術為基礎的性傳播疾病病原體寡核苷酸檢測芯片，實現 了淋球菌、沙眼衣原體和解脲脲原體三種病原體的同時多樣本檢測。 通過芯片制備工藝條件研究確定制備性傳播疾病病原體檢測芯片的最佳方案 是采用長度40mer，3’端雙功能修飾的寡核苷酸探針點制到醛基片上制備芯片。在 此基礎上，設計并合成了三種病原體以及熒光素酶基因和大豆基因特異的引物和 探針序列。以此引物和探針對性病檢測芯片優(yōu)化結果顯示：選取點樣液A和雜交 液B，探針序列靠近熒光標記引物端，探針濃度以50μM，雜交溫度以42℃，雜交 時間以60min，PCR產物經加熱變性后與雜交液以1：2比例制備檢測芯片為宜。對 該芯片的檢測靈敏度進行條件優(yōu)化表明：在25μl PCR反應體系中，淋球菌、沙眼 衣原體和解脲脲原體和熒光素酶基因正向引物濃度分別為0． 225μM、0． 135μM、 0． 15μM和0． 3μM，反向Cy3標記的熒光標記引物濃度分別為2． 25μM、1． 35μM、 1． 5μM和3μM，dNTP為300μM，MgCl2 3mM，KCl 7...

【文章頁數】：107 頁

【學位級別】：博士

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摘要
Abstract
引言
一、 寡核苷酸芯片制備工藝條件的確定
二、 性傳播疾病病原體寡核苷酸檢測芯片的制備
三、 熒光標記多重不對稱PCR的靈敏度優(yōu)化
四、 性傳播疾病病原體檢測芯片的性能評價
結論
參考文獻
致謝
發(fā)表文章
    研究論文 性傳播疾病病原體檢測芯片的制備
文獻綜述 性傳播疾病病原體檢測方法的研究現狀
文獻綜述 基因芯片及其在性傳播疾病病原體研究中的應用



本文編號：3837629