目的根據(jù)本院收集的黑素瘤組織標(biāo)本分析長鏈非編碼RNA DANCR(long non-coding RNA differentiation antagonizing non-protein coding RNA,LncRNA DANCR)與黑素瘤臨床預(yù)后關(guān)系。闡明DANCR在黑素瘤侵襲中所扮演的角色。方法用激光捕獲法獲取黑素瘤組織標(biāo)本以分析DANCR表達量與黑素瘤患者臨床進展的關(guān)系;用A375和B16細胞株行體外實驗,以慢病毒為載體在細胞中敲低DANCR。基質(zhì)膠覆蓋的上層小室用于Transwell模型檢測細胞侵襲能力;通過Western blot實驗和ELISA檢測MMP2、MMP9在細胞中表達水平和細胞外分泌水平。通過Western blot實驗檢測p-YAP和YAP表達以明確其活性;用XMU-MP-1和Verteporfin(VP)分別在黑素瘤細胞株中激活和抑制YAP活性。結(jié)果臨床數(shù)據(jù)分析可得,DANCR表達量與臨床M分期和病理N分期、Breslow深度和Clark值均密切相關(guān)。在A375和B16細胞中敲低DANCR可抑制細胞侵襲,并下調(diào)MMP2、MMP9表達和細胞外分泌(P<...

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【文章目錄】：
1 材料和方法
    1.1 材料
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)和RNA穩(wěn)定干擾細胞系建立
        1.2.2 Western blot檢測
        1.2.3 細胞總RNA提取、反轉(zhuǎn)錄和qRT-PCR檢測
        1.2.4 細胞侵襲分析
        1.2.5 激光捕獲微檢測
        1.2.6 移植瘤模型和體內(nèi)轉(zhuǎn)移分析
        1.2.7 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 用激光捕獲獲取患者黑素瘤瘤體組織,檢測DANCR表達
    2.2 敲低DANCR可抑制黑素瘤細胞侵襲
    2.3 敲低DANCR下調(diào)YAP,而激活YAP促進黑素瘤細胞侵襲
    2.4 DANCR通過激活YAP調(diào)控黑素瘤細胞侵襲
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