目的：探索MacroH2A對體外培養(yǎng)B16黑色素瘤細(xì)胞的細(xì)胞周期及凋亡的影響,以及其對黑色素瘤細(xì)胞cyclinD1、cyclinD3、CDK4、 CDK6、CDK8表達(dá)的調(diào)控作用。探討MacroH2A對黑色素瘤進(jìn)展及對細(xì)胞周期影響的分子機(jī)制,更進(jìn)一步了解惡性黑色素瘤的發(fā)生發(fā)展機(jī)制,并為惡性黑色素瘤的靶向治療提供新的可能性方法。 方法：構(gòu)建MacroH2A干擾表達(dá)載體質(zhì)粒MacroH2A-shRNA質(zhì)粒和超表達(dá)載體質(zhì)粒MacroH2A-pcDNA3.1(+)質(zhì)粒,將黑色素瘤細(xì)胞隨機(jī)分為五組即空載質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,超表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,干擾表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染組,超表達(dá)后救援組,干擾表達(dá)后救援組。不同分組黑色素瘤細(xì)胞進(jìn)行相應(yīng)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后,采用Realtime-PCR,western blot和免疫熒光等檢驗(yàn)方法分別于mRNA和蛋白質(zhì)水平分析MacroH2A表達(dá)量以確定各組細(xì)胞成功轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染效率。用流式細(xì)胞術(shù)檢測黑色素瘤細(xì)胞凋亡及和細(xì)胞所處不同細(xì)胞周期,并采用Realtime-PCR、western blot檢測細(xì)胞周期調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因素cyclinD1、 cyclinD3、CDK4、CDK6、CDK8相應(yīng)mRNA...

【文章頁數(shù)】：41 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 引言
2 材料和方法
    2.1 細(xì)胞和主要試劑
    2.2 主要儀器
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 載體設(shè)計和細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        2.3.3 細(xì)胞分組及處理
        2.3.4 Realtime PCR
        2.3.5 Western blot
        2.3.6 免疫熒光檢驗(yàn)
        2.3.7 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡和細(xì)胞周期
    2.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析
3 結(jié)果
    3.1 B16黑色素瘤細(xì)胞MacroH2A的超表達(dá)及翻譯
    3.2 MacroH2A對黑色素瘤B16細(xì)胞進(jìn)展的調(diào)節(jié)作用
    3.3 MacroH2A對細(xì)胞周期蛋白D和CDK的調(diào)節(jié)
4 討論
5 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝



本文編號：3826925