目的探討shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1, PAK1)基因表達(dá)對人黑素瘤A375細(xì)胞凋亡、遷移及侵襲能力的影響。方法對數(shù)生長期人黑素瘤A375細(xì)胞隨機(jī)分為轉(zhuǎn)染組(轉(zhuǎn)染PAK1特異性shRNA)、陰性對照組(轉(zhuǎn)染NC-shRNA)、空白對照組(不進(jìn)行轉(zhuǎn)染)。轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)72 h,采用實時熒光定量PCR法檢測A375細(xì)胞PAK1 mRNA相對表達(dá)量,采用Western blot法檢測A375細(xì)胞PAK1及p-PAK1蛋白相對表達(dá)量,采用流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡率,采用Transwell小室實驗檢測細(xì)胞遷移、侵襲能力。結(jié)果轉(zhuǎn)染后培養(yǎng)72 h,轉(zhuǎn)染組PAK1 mRNA相對表達(dá)量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相對表達(dá)量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相對表達(dá)量(0.21±0.03)均低于陰性對照組(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白對照組(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P<0.05),細(xì)胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于陰性對照組[(5.86±0.51)%]、空白對...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 一般材料
    1.2 方法
        1.2.1 A375細(xì)胞復(fù)蘇與培養(yǎng)
        1.2.2 細(xì)胞分組及轉(zhuǎn)染
        1.2.3 實時熒光定量PCR法檢測PAK1 mRNA相對表達(dá)量
        1.2.4 Western blot法檢測PAK1蛋白及p-PAK1蛋白相對表達(dá)量
        1.2.5 流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡
        1.2.6 Transwell小室實驗檢測細(xì)胞遷移、侵襲能力
    1.3 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié) 果
    2.1 A375細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率
    2.2 3組PAK1 mRNA及PAK1、p-PAK1蛋白相對表達(dá)量比較
    2.3 3組細(xì)胞凋亡率比較
    2.4 3組細(xì)胞遷移、侵襲能力比較
3 討 論



本文編號：3803377