目的探討shRNA沉默p21活化激酶1(p21-activated kinase 1, PAK1)基因表達對人黑素瘤A375細胞凋亡、遷移及侵襲能力的影響。方法對數(shù)生長期人黑素瘤A375細胞隨機分為轉染組(轉染PAK1特異性shRNA)、陰性對照組(轉染NC-shRNA)、空白對照組(不進行轉染)。轉染后培養(yǎng)72 h,采用實時熒光定量PCR法檢測A375細胞PAK1 mRNA相對表達量,采用Western blot法檢測A375細胞PAK1及p-PAK1蛋白相對表達量,采用流式細胞術檢測細胞凋亡率,采用Transwell小室實驗檢測細胞遷移、侵襲能力。結果轉染后培養(yǎng)72 h,轉染組PAK1 mRNA相對表達量(0.45±0.07)、PAK1蛋白相對表達量(0.53±0.01)、p-PAK1蛋白相對表達量(0.21±0.03)均低于陰性對照組(0.98±0.04、0.65±0.02、0.38±0.04)、空白對照組(1.00±0.08、0.67±0.51、0.36±0.02)(P<0.05),細胞凋亡率[(11.20±0.21)%]高于陰性對照組[(5.86±0.51)%]、空白對...

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 一般材料
    1.2 方法
        1.2.1 A375細胞復蘇與培養(yǎng)
        1.2.2 細胞分組及轉染
        1.2.3 實時熒光定量PCR法檢測PAK1 mRNA相對表達量
        1.2.4 Western blot法檢測PAK1蛋白及p-PAK1蛋白相對表達量
        1.2.5 流式細胞術檢測細胞凋亡
        1.2.6 Transwell小室實驗檢測細胞遷移、侵襲能力
    1.3 統(tǒng)計學處理
2 結 果
    2.1 A375細胞轉染效率
    2.2 3組PAK1 mRNA及PAK1、p-PAK1蛋白相對表達量比較
    2.3 3組細胞凋亡率比較
    2.4 3組細胞遷移、侵襲能力比較
3 討 論



本文編號：3803377