目的:探討ATP-檸檬酸裂解酶(ATP-citrate lyase,ACLY)在黑素瘤維羅非尼治療抵抗中的作用及其可能機制。方法:通過Western blot實驗檢測5μM維羅非尼處理前后黑素瘤細(xì)胞中ACLY的表達(dá)水平,采用shRNA干涉黑素瘤細(xì)胞中ACLY的表達(dá)后再給予5μM維羅非尼處理,通過流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡水平;通過Western blot實驗檢測黑素瘤特異性轉(zhuǎn)錄因子MITF的表達(dá)水平,以及抗凋亡蛋白BCL-2和促凋亡蛋白BAX的表達(dá)水平。結(jié)果:1)維羅非尼處理后黑素瘤細(xì)胞ACLY的表達(dá)水平較處理前明顯升高;2)沉默ACLY可以顯著增加維羅非尼處理后黑素瘤細(xì)胞的凋亡水平;3)在維羅非尼處理下,沉默ACLY可以導(dǎo)致MITF和BCL-2表達(dá)水平較對照組顯著降低,BAX表達(dá)水平升高。結(jié)論:ACLY表達(dá)水平升高參與了黑素瘤維羅非尼治療抵抗,可能與其調(diào)控MITF表達(dá)的作用有關(guān)。

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
前言
1 材料和方法
    1.1 主要細(xì)胞、試劑和儀器
        1.1.1 黑素瘤細(xì)胞系
        1.1.2 實驗試劑
        1.1.3 實驗儀器
    1.2 實驗方法和步驟
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 分組與藥物處理
        1.2.3 Western blot實驗
        1.2.4 ShRNA轉(zhuǎn)染
        1.2.5 流式細(xì)胞凋亡檢測
    1.3 統(tǒng)計方法
2 結(jié)果
    2.1 維羅非尼處理可促進(jìn)黑素瘤細(xì)胞ACLY表達(dá)水平升高
    2.2 ACLY沉默效率驗證
    2.3 沉默ACLY可以顯著增加維羅非尼誘導(dǎo)的黑素瘤細(xì)胞凋亡水平
    2.4 在維羅非尼處理下沉默ACLY導(dǎo)致MITF和BCL-2表達(dá)水平降低，BAX表達(dá)水平升高
3 討論



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