目的黑色素瘤因其惡性程度極高而成為皮膚惡性腫瘤致死的主要原因之一,高發(fā)的侵襲和轉(zhuǎn)移是其最為顯著的特征和影響患者生存的首要因素。黑色素瘤的發(fā)病主要與紫外線(xiàn)的過(guò)度照射、環(huán)境因素、遺傳因素、外界刺激等因素相關(guān),目前治療的主要方式包括手術(shù)、化療、放療和藥物治療,但預(yù)后較差,復(fù)發(fā)率高,病死率高。腫瘤細(xì)胞的無(wú)限生長(zhǎng)和機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答之間的相互作用是影響腫瘤發(fā)生發(fā)展的主要原因,為了有效激活機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答,腫瘤免疫治療得到了廣泛的關(guān)注和迅速發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn),黑色素瘤免疫原性高,通過(guò)對(duì)其進(jìn)行免疫治療,增強(qiáng)機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答,能有效的抑制腫瘤的生長(zhǎng),這也使得黑色素瘤的免疫治療得到迅速的發(fā)展。Pim-3作為一種絲/蘇氨酸蛋白激酶,在多種癌癥中異常表達(dá)增加,主要通過(guò)磷酸化特異性底物使其失去活性,導(dǎo)致細(xì)胞凋亡減少、增殖增多,最終調(diào)控腫瘤的發(fā)生發(fā)展,因此Pim-3可能成為抗腫瘤治療的一個(gè)新靶點(diǎn)�；谝陨媳尘�,我們嘗試一方面利用具有免疫刺激作用的單鏈RNA(ssRNA)序列激活機(jī)體TLR-7受體,進(jìn)而誘導(dǎo)細(xì)胞因子的產(chǎn)生,活化免疫效應(yīng)細(xì)胞,最終刺激機(jī)體抗腫瘤免疫應(yīng)答,引起機(jī)體免疫系統(tǒng)對(duì)癌細(xì)胞的自主殺傷及清除;另一...

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
主要符號(hào)說(shuō)明
文獻(xiàn)綜述 基于免疫刺激和基因沉默的雙功能靶向腫瘤基因免疫治療
    1. 腫瘤生長(zhǎng)及腫瘤微環(huán)境的特點(diǎn)
    2. 兼具靶基因沉默和免疫刺激作用的雙功能免疫治療
    3. 雙功能免疫治療中抑制腫瘤生長(zhǎng)的靶點(diǎn)
    4. 刺激或喚起抗腫瘤免疫應(yīng)答的策略
    5. 雙功能免疫療法的應(yīng)用
    參考文獻(xiàn)
1 前言
2 材料和方法
    2.1 主要實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 細(xì)胞系
        2.1.2 細(xì)胞培養(yǎng)基
        2.1.3 STAT3激動(dòng)劑和抑制劑
        2.1.4 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物與試劑
        2.1.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞表面分子所用的熒光標(biāo)記抗體如表1所示
        2.1.6 動(dòng)物體內(nèi)試驗(yàn)所用的試劑
        2.1.7 PCR實(shí)實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染試驗(yàn)中用到的試劑
        2.1.9 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡試劑盒
        2.1.10 一步法TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.1.11 Western Blot所需試劑
        2.1.12 中量提取質(zhì)粒所需試劑
        2.1.13 細(xì)胞ELISA檢測(cè)試劑盒
    2.2 主要儀器設(shè)備
    2.3 主要實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        2.3.2 細(xì)胞傳代
        2.3.3 細(xì)胞凍存
        2.3.4 細(xì)胞復(fù)蘇
        2.3.5 小量中提質(zhì)粒
        2.3.6 用所提取的質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞
        2.3.7 細(xì)胞總RNA的提取
        2.3.8 RT-PCR
        2.3.9 Real-time PCR
        2.3.10 Western-blot檢測(cè)細(xì)胞蛋白水平
        2.3.11 Transwell(小室)實(shí)驗(yàn)
        2.3.12 ELISA檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清或小鼠血清中細(xì)胞因子的含量
        2.3.13 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.3.14 一步法TUNEL檢測(cè)細(xì)胞凋亡
        2.3.15 小鼠黑色素瘤模型的建立
        2.3.16 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 黑色素瘤中Pim-3高表達(dá)
    3.2 ssRNA-Pim-3-shRNA雙功能質(zhì)粒在黑色素瘤中的功能驗(yàn)證
    3.3 ssRNA-Pim-3-shRNA雙功能質(zhì)粒對(duì)B16細(xì)胞凋亡的影響
    3.4 ssRNA-Pim-3-shRNA雙功能質(zhì)粒對(duì)B16細(xì)胞增殖和周期的影響
    3.5 ssRNA-Pim-3-shRNA雙功能質(zhì)粒體內(nèi)抑制腫瘤的作用
    3.6 NK、CD8⁺T細(xì)胞在雙功能載體介導(dǎo)的抗腫瘤治療中發(fā)揮作用
    3.7 pDC在雙功能載體介導(dǎo)的抗腫瘤治療中發(fā)揮作用
    3.8 雙功能載體及Pim-3-shRNA抑制黑色素瘤的肺轉(zhuǎn)移
    3.9 沉默Pim-3抑制B16細(xì)胞的遷移和侵襲
    3.10 沉默Pim-3抑制B16細(xì)胞的上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)換
    3.11 Pim-3通過(guò)p-STAT3介導(dǎo)B16細(xì)胞的轉(zhuǎn)移侵襲
5 討論
參考文獻(xiàn)
文章創(chuàng)新點(diǎn)及意義
攻讀學(xué)位期間取得的成果和獎(jiǎng)勵(lì)
致謝
學(xué)位論文評(píng)閱及答辯情況表



本文編號(hào)：3775423