發(fā)布時(shí)間：2017-05-16 17:10

  本文關(guān)鍵詞：DNA損傷修復(fù)基因多態(tài)性與白癜風(fēng)罹患危險(xiǎn)及光療預(yù)后的關(guān)聯(lián)及機(jī)制研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：白癜風(fēng)是一種常見的色素脫失性疾病，其主要病理特征為皮損部位黑素細(xì)胞的明顯減少或消失。黑素細(xì)胞破壞或凋亡的機(jī)理迄今尚未完全闡明，關(guān)于白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制的研究涉及自身免疫、代謝毒素、神經(jīng)因子、遺傳易感及氧化應(yīng)激等眾多方面。近年研究證實(shí)，氧化應(yīng)激與黑素細(xì)胞受損之間存在著密切聯(lián)系，白癜風(fēng)患者皮損區(qū)H2O2存在過(guò)量蓄積。在體內(nèi)氧化應(yīng)激造成的DNA損傷的修復(fù)過(guò)程中，堿基切除修復(fù)(BER)通路起著主導(dǎo)作用。BER通路中關(guān)鍵酶的基因多態(tài)性與個(gè)體間DNA修復(fù)能力的強(qiáng)弱差異緊密相關(guān)，因此可能導(dǎo)致個(gè)體間清除UV、過(guò)氧化氫等氧化損傷的能力不同及罹患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)差異。而在白癜風(fēng)的治療方面，窄譜中波紫外線(NB-UVB)是一種常用的有效手段，其治療機(jī)理在于照射過(guò)程中形成環(huán)丁烷嘧啶二聚體(CPDs)等DNA光化產(chǎn)物，從而誘導(dǎo)皮膚的免疫抑制狀態(tài)。而DNA光化產(chǎn)物的修復(fù)則主要由核苷酸切除修復(fù)(NER)通路來(lái)執(zhí)行。NER通路關(guān)鍵酶的基因也存在著多態(tài)性，可導(dǎo)致個(gè)體間DNA光化產(chǎn)物修復(fù)能力的差異，介導(dǎo)不同的免疫抑制狀態(tài)，從而影響白癜風(fēng)患者的光療預(yù)后。 目前尚無(wú)DNA損傷修復(fù)基因多態(tài)性與白癜風(fēng)罹患危險(xiǎn)和光療預(yù)后的相關(guān)研究。因此，我們通過(guò)大樣本病例對(duì)照研究，分析檢測(cè)BER、NER通路關(guān)鍵基因的功能性單核甘酸多態(tài)性(SNP)位點(diǎn)在白癜風(fēng)患者和健康對(duì)照人群的分布差異，結(jié)合功能學(xué)研究，揭示DNA損傷修復(fù)基因多態(tài)性與白癜風(fēng)易感性和光療預(yù)后的相關(guān)性，為白癜風(fēng)發(fā)病機(jī)制研究和臨床治療提供新的線索和理論依據(jù)。 方法： 通過(guò)在線數(shù)據(jù)庫(kù)和文獻(xiàn)查找并確認(rèn)BER、NER基因中MAF5%的功能性SNP位點(diǎn)及其在中國(guó)人群中的分布情況。首先，通過(guò)PCR-RFLP的方法分別檢測(cè)4個(gè)BER SNP位點(diǎn)(hOGG1Ser326Cys、APE1Asp148Glu、ADPRT Val762Ala、XRCC1Arg399Gln)的基因型在1000例白癜風(fēng)患者和1000例健康對(duì)照中的分布差異，4個(gè)NER SNP位點(diǎn)(XPA A23G、XPC Ci11A、XPC Lys939Gln、ERCC1C118T)的基因型在86例接受NB-UVB照射治療的進(jìn)展期白癜風(fēng)患者中的分布頻率，SAS軟件分析不同基因型與白癜風(fēng)罹患危險(xiǎn)和光療預(yù)后的關(guān)聯(lián)性。選擇其中具有顯著關(guān)聯(lián)性的SNP位點(diǎn)進(jìn)行功能學(xué)驗(yàn)證。一方面，構(gòu)建不同基因型的真核表達(dá)質(zhì)粒，轉(zhuǎn)染黑素細(xì)胞系PIG1，ELISA和核苷酸熒光電泳檢測(cè)不同基因型黑素細(xì)胞抵抗氧化應(yīng)激損傷的能力和蛋白酶活性的差異，ELISA檢測(cè)不同基因型個(gè)體血清中8-OHdG水平差異，進(jìn)一步驗(yàn)證BER SNP參與氧化應(yīng)激條件下黑素細(xì)胞受損的具體機(jī)制。另一方面，流式細(xì)胞術(shù)、ELISA檢測(cè)NB-UVB照射下不同基因型個(gè)體外周血T淋巴細(xì)胞凋亡差異和CPDs產(chǎn)生水平，驗(yàn)證NER SNP對(duì)白癜風(fēng)光療預(yù)后的影響。 結(jié)果： 1.通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與攜帶有APE1148Asp/Asp基因型的個(gè)體相比，攜帶Asp/Glu和Glu/Glu基因型的個(gè)體其罹患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)顯著增加(校正OR1.24,95%可信區(qū)間1.02-1.52;校正OR1.48,95%可信區(qū)間1.13-1.93)，而其它3個(gè)BER SNP位點(diǎn)與白癜風(fēng)罹患危險(xiǎn)無(wú)明顯關(guān)系。進(jìn)一步的APE1Asp148Glu基因型與臨床表型關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)白癜風(fēng)易感性的增加主要表現(xiàn)在以下臨床表型中：發(fā)病年齡大于20歲、女性、非節(jié)段型白癜風(fēng)、病情活動(dòng)、無(wú)白癜風(fēng)家族史、不伴有其它自身免疫性疾病者。 2. ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，與攜帶有APE1148Asp/Asp基因型的患者相比，攜帶Asp/Glu和Glu/Glu基因型的患者其外周血血清8-OHdG水平顯著升高(P 0.001)，該差異在吸煙患者中也明顯存在(P 0.001)。進(jìn)一步的分層分析發(fā)現(xiàn)，外周血血清8-OHdG水平與白癜風(fēng)罹患危險(xiǎn)存在一種劑量依賴關(guān)系(Ptrend0.05)。APE1Asp148Glu基因型與環(huán)境因素關(guān)聯(lián)分析發(fā)現(xiàn)，擁有APE11481-2個(gè)危險(xiǎn)等位基因(Asp/Glu或Glu/Glu)伴血清中較高8-OHdG水平(≥694.71pg/ml)的個(gè)體，其罹患白癜風(fēng)的危險(xiǎn)性顯著高于擁有0個(gè)危險(xiǎn)等位基因(Asp/Asp)伴較低8-OHdG水平(533.84pg/ml)的個(gè)體(校正OR,3.99,95%CI,1.29 12.38)。 3.成功構(gòu)建APE1Asp148Glu不同等位基因的表達(dá)質(zhì)粒pCDNA3.1-APE1-148Asp和pCDNA3.1-APE1-148Glu。在H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激條件下，ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-APE1-148Asp組與轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-APE1-148Glu組相比其8-OHdG水平顯著下降(P 0.05)。核苷酸熒光電泳結(jié)果顯示，轉(zhuǎn)染pCDNA3.1-APE1-148Asp和pCDNA3.1-APE1-148Glu表達(dá)質(zhì)粒組的黑素細(xì)胞相比，其蛋白提取物核酸內(nèi)切酶活性物無(wú)明顯改變。 4.通過(guò)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析發(fā)現(xiàn)，與攜帶ERCC1118TT和CT基因型的患者相比，攜帶CC基因型的患者其NB-UVB治療效果更好：復(fù)色效果較佳，治療時(shí)間縮短，累積照射劑量降低，首次復(fù)色時(shí)間提前(P=0.010; P=0.005; P=0.018; P=0.026)。而其它3個(gè)NER SNP位點(diǎn)與白癜風(fēng)光療預(yù)后未見明顯相關(guān)。 5.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示，NB-UVB照射下，與攜帶ERCC1118TT和CT基因型的患者相比，攜帶CC基因型的患者T淋巴細(xì)胞早期和晚期凋亡比率均增加(P 0.01)。ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，NB-UVB照射下，與攜帶ERCC1118TT和CT基因型的患者相比，攜帶CC基因型的患者T淋巴細(xì)胞中CPDs水平顯著升高。 結(jié)論： 1. APE1Asp148Glu該SNP位點(diǎn)與白癜風(fēng)發(fā)病顯著相關(guān)，Asp/Glu和Glu/Glu基因型的個(gè)體與Asp/Asp基因型的個(gè)體相比患病危險(xiǎn)增高；hOGG1Ser326Cys、ADPRTVal762Ala、XRCC1Arg399Gln3個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)白癜風(fēng)發(fā)病無(wú)明顯影響。 2. APE1Asp148Glu該SNP變異可減弱BER修復(fù)能力，增加黑素細(xì)胞的氧化性DNA損傷，導(dǎo)致黑素細(xì)胞受損，從而增加白癜風(fēng)的罹患危險(xiǎn)。 3. ERCC1C118T該SNP位點(diǎn)與白癜風(fēng)光療預(yù)后有顯著關(guān)聯(lián)性，CC基因型的個(gè)體與TT和CT聯(lián)合基因型的個(gè)體相比具有較好的預(yù)后效果；XPA A23G、XPC Ci11A、XPC Lys939Gln3個(gè)SNP位點(diǎn)對(duì)白癜風(fēng)光療預(yù)后無(wú)明顯影響。 4. ERCC1C118T CC基因型可導(dǎo)致T淋巴細(xì)胞NB-UVB照射下DNA光化產(chǎn)物CPDs的增多，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，從而參與白癜風(fēng)光療的預(yù)后。
【關(guān)鍵詞】：白癜風(fēng) APE1 ERCC1 單核苷酸多態(tài)性 8-OHdG CPDs 氧化應(yīng)激 光療
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號(hào)】：R758.41
【目錄】：

• 縮略語(yǔ)表5-8
• 中文摘要8-12
• 英文摘要12-16
• 前言16-17
• 文獻(xiàn)回顧17-26
• 實(shí)驗(yàn)一 BER 基因單核苷酸多態(tài)性與白癜風(fēng)罹患危險(xiǎn)的關(guān)聯(lián)性研究26-42
• 1 材料26-27
• 2 方法27-31
• 3 結(jié)果31-40
• 4 討論40-42
• 實(shí)驗(yàn)二 APE1ASP148GLU單核苷酸多態(tài)性提高人黑素細(xì)胞氧化損傷程度的機(jī)制研究42-52
• 1 材料42-43
• 2 方法43-45
• 3 結(jié)果45-49
• 4 討論49-52
• 實(shí)驗(yàn)三 NER 基因單核苷酸多態(tài)性與白癜風(fēng)光療預(yù)后的關(guān)聯(lián)性研究52-63
• 1 材料52-53
• 2 方法53-56
• 3 結(jié)果56-60
• 4 討論60-63
• 實(shí)驗(yàn)四 ERCC1 C118TCC 基因型提高白癜風(fēng)光療預(yù)后效果的機(jī)制研究63-72
• 1 材料63-64
• 2 方法64-66
• 3 結(jié)果66-69
• 4 討論69-72
• 小結(jié)72-74
• 參考文獻(xiàn)74-87
• 附錄87-90
• 個(gè)人簡(jiǎn)歷和研究成果90-91
• 致謝91

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前10條

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本文編號(hào)：371426