發(fā)布時間：2022-08-02 16:14

　　痤瘡是一種常見的毛囊皮脂腺炎癥性皮膚病,主要由厭氧性座瘡丙酸桿菌所致,目前主要采用抗生素治療,但療效不理想,并且可導致抗性菌的產(chǎn)生和超敏反應。新近從金環(huán)蛇蛇毒中分離的抗菌肽Cath-BF屬于第一個被報道的脊椎動物來源抗菌肽,該抗菌肽可在小鼠模型中有效抑制痤瘡丙酸桿菌及其它痤瘡感染菌的生長,并抑制相關炎性增生,因此在痤瘡防治中具有重要的應用價值。天然分離的Cath-BF為30個氨基酸殘基組成的多肽,而根據(jù)其c DNA編碼產(chǎn)物推斷的該抗菌肽在N端應該還有4個氨基酸殘基,即天然長度應該為34個氨基酸殘基,,但目前尚未有實驗證明該結(jié)構形式的抗菌肽是否存在及有無抑菌活性。蛇毒來源有限,從中制備抗菌肽得率低,成本高,化學合成抗菌肽同樣存在成本高的問題,因此,采用基因工程手段建立高效生產(chǎn)方法對于Cath-BF的推廣應用具有現(xiàn)實意義。畢赤酵母（Pichia pastoris）系統(tǒng)是最成熟的外源基因高效表達系統(tǒng),遺傳背景清楚、可高密度發(fā)酵,因而具有良好的工業(yè)化性能。其組成型表達系統(tǒng)是基于磷酸甘油醛脫氫酶的強啟動子p GAP,無需像AOX1啟動子那樣采用甲醇誘導,用于人用產(chǎn)品的生產(chǎn)更安全。另外,Cath-... 

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
第一章 緒論
    1 前言
    2 抗菌肽的研究進展
    3 蛇毒抗菌肽的研究進展
    4 蛇毒抗菌肽表達系統(tǒng)的選擇
    5 本課題的研究基礎與內(nèi)容
第二章 金環(huán)蛇抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 表達載體的構建
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 菌種和質(zhì)粒
        2.2 主要試劑
        2.3 主要儀器設備
    3 實驗方法
        3.1 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 目的基因的設計與合成
        3.2 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 克隆載體的構建
        3.3 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 重組酵母菌的構建
    4 結(jié)果
        4.1 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 基因設計
        4.2 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 基因合成與克隆鑒定
        4.3 蛇毒抗菌肽Cath-BF30 與Cath-BF34 表達載體的構建
        4.4 蛇毒抗菌肽Cath-BF畢赤酵母轉(zhuǎn)化子篩選與鑒定
    5 討論
    6 小結(jié)
第三章 金環(huán)蛇抗菌肽工程菌表達產(chǎn)物活性鑒定、發(fā)酵與純化
    1 前言
    2 實驗材料
        2.1 菌種和質(zhì)粒
        2.2 主要試劑
        2.3 主要培養(yǎng)基
    3 實驗方法
        3.1 抗菌肽粗樣品的獲得
        3.2 透明斑法鑒定抗菌肽粗樣品活性
        3.3 96孔板再次鑒定抗菌肽粗產(chǎn)品活性
        3.4 pH值對目的基因表達影響觀察
        3.5 蛇毒抗菌肽工程菌的發(fā)酵
        3.6 SP強陽離子純化蛇毒抗菌肽
    4 結(jié)果
        4.1 透明斑法鑒定抗菌肽粗品活性
        4.2 96 孔板鑒定抗菌肽粗品活性
        4.3 培養(yǎng)基pH值對Cath-BF分泌表達產(chǎn)物的影響
        4.4 SMD-Cath-BF大規(guī)模發(fā)酵
        4.5 Cath-BF表達產(chǎn)物分離純化
    5 討論
    6 結(jié)論
第四章 結(jié)論
參考文獻
附錄
    附錄1 文獻綜述
        參考文獻
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Crude extract of maggots:Antibacterial effects against Escherichia coli,underlying mechanisms,separation and purification[J]. Quan-Sheng Ge,Hui-Min Zhang,Xia Liu,Shou-Yu Wang,De-Cheng Lv,Xu-Dong Li.  World Journal of Gastroenterology. 2015(05)
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博士論文
[1]抗HCV/HIV多肽的結(jié)構與活性研究及多肽的抗癌作用機理研究[D]. 李桂榮.吉林大學 2014
[2]五種抗菌肽的設計、原核表達和抗菌作用機理研究[D]. 衣同輝.吉林大學 2014
[3]基于肽—膜相互作用的模擬細胞膜法篩選抗菌肽的研究[D]. 唐文婷.江南大學 2014
[4]乳酸菌的分離鑒定及其抗菌肽與發(fā)酵性能研究[D]. 華鶴良.揚州大學 2014

碩士論文
[1]產(chǎn)ClassⅡa類抗菌肽乳酸菌的篩選及其抗菌特性研究[D]. 侯亞文.哈爾濱工業(yè)大學 2013



本文編號：3668838