目的：利用激光的生物刺激效應(yīng)研究低強(qiáng)度592 nm和630 nm激光對成年人及老年人皮膚成纖維細(xì)胞的增殖活性的作用,以及對前膠原基因和細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)分子SMAD基因表達(dá)的影響,為低強(qiáng)度592 nm和630 nm激光用于改善皮膚老化提供細(xì)胞學(xué)依據(jù)和可供參考的治療參數(shù)。方法：1.用體外培養(yǎng)的成年人和老年人真皮成纖維細(xì)胞作為細(xì)胞模型,分別以波長592 nm和630 nm的連續(xù)激光對細(xì)胞進(jìn)行照射,照射功率為10 mw和30mw,功率密度為3.5mw/cm2和10.6mw/cm2,分別非重疊照射2 min、5 min和10 min,連續(xù)照射3 d,用于檢測細(xì)胞增殖活性；功率密度為3.5 mw/cm2和10.6mw/cm2,分別非重疊照射5min和10min,連續(xù)照射3 d,用于檢測前膠原基因和SMADs mRNA表達(dá)。2.激光照射前以及每次照射后24 h,用相差顯微鏡對細(xì)胞照相,比較細(xì)胞形態(tài)、數(shù)量的變化。3.用MTT比色法檢測細(xì)胞增殖活性。4.應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測細(xì)胞前膠原Ⅰ型α1、Ⅰ型α2、Ⅲα1以及SMADs mRNA的表達(dá),用Bandscan5.0凝膠成像系統(tǒng)分析軟件測定PCR產(chǎn)物電泳... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：63 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

孔培養(yǎng)板接種示意圖

天津醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文第三章結(jié)果3.1細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察由于%孔培養(yǎng)板的底部凹凸不平，相差顯微鏡不能清晰成像，故細(xì)胞形態(tài)學(xué)照片以6孔板為例，首先在顯微鏡下觀察細(xì)胞分布情況，從各實(shí)驗(yàn)孔和對照孔選擇細(xì)胞數(shù)目和分布相似的區(qū)域，在外蓋上對應(yīng)的位置做標(biāo)記，從種植后24h，到照射實(shí)驗(yàn)結(jié)束后的24h，用100X相差顯微鏡連續(xù)四天在同一時(shí)間對各做標(biāo)記的位置照相，以630Inn激光照射細(xì)胞為例，結(jié)果如下:

圖14高功率密度(l0.6mw/。擴(kuò))組照射后60h3.2MTT法檢測激光對皮膚成纖維細(xì)胞增殖活性的影響原理:四哇鹽比色法試驗(yàn)是一種檢測細(xì)胞存活和生長的方法。實(shí)驗(yàn)所用的顯色劑四哇鹽是一種能接受氫原子的染料，化學(xué)名為3一(4，5一二甲基唆哇一2)一2，5一二苯基四氮哇澳鹽，商品名是唆哇鹽，簡稱為MTT。活細(xì)胞線粒體中的玻拍酸脫氫酶能使外源性的M竹還原為難溶性的藍(lán)紫色結(jié)晶物少ormaZan)，并沉積在細(xì)胞中，而死細(xì)胞則無此功能。二甲基亞礬價(jià)MsO)能夠溶解細(xì)胞中的紫色結(jié)晶物，用酶聯(lián)免疫檢測儀在550一600Inn波長處測定光吸收度可間接反映細(xì)胞增殖活性。在一定細(xì)胞數(shù)目范圍內(nèi)，MTT結(jié)晶物形成的量與細(xì)胞數(shù)成正比。將每個(gè)實(shí)驗(yàn)孔的吸光度值連續(xù)測量三次，分別取平均值，數(shù)據(jù)用SPSSI1.5

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3597186