本文關鍵詞：中國彈力纖維假黃瘤臨床病理特征與ABCC6基因新致病性突變的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：彈力纖維假黃瘤(PXE)是緣于ABCC6基因突變導致的常染色體隱性遺傳病，該病人群中的發(fā)病率還未有明確統(tǒng)計，據(jù)估計約為1:70000～1:100000。PXE臨床上可累及皮膚、眼底及心血管等多個系統(tǒng)，早期皮膚損害為頸部及身體皺襞部位的黃色丘疹，逐漸融合成松弛性斑塊。眼部受累多由于Bruch’s膜的鈣化形成血管樣條紋，可以導致視力受損，甚至視力喪失。心血管受損源于動脈血管的礦化作用，包括動脈粥樣硬化、下肢間歇性跛行、高血壓等，有時會引起早期心肌梗死。此外，彈力纖維假黃瘤還能引起胃腸道出血，由于異常礦化作用使鈣質(zhì)沉積在不同的器官，包括肝、腎、脾、乳房、睪丸等。彈力纖維假黃瘤皮膚表現(xiàn)是類似的，病情預后取決于眼底及心血管等系統(tǒng)的并發(fā)癥。皮膚和眼底的受累常常發(fā)生于青春期，也可發(fā)生于更早的幼年時期，心血管并發(fā)癥常常出現(xiàn)較晚，多發(fā)生于成年期。 ABCC6基因位置在16號染色體1區(qū)上，包括31個外顯子，編碼1503個氨基酸構成跨膜轉(zhuǎn)運蛋白，稱為多藥耐藥相關蛋白即MRP6。這種跨膜蛋白主要表達在肝臟上，腎臟和腸道也有一定水平的表達，，但PXE患者受累的皮膚、眼部及心血管系統(tǒng)則只能檢測到很微量的表達。ABCC6基因的功能是作為一種有機陰離子輸出泵，從肝臟到外周循環(huán)輸送不確定的分子物質(zhì)。近來研究通過建立敲除ABCC6基因的小鼠模型，已經(jīng)證實PXE是一種代謝紊亂性疾病，但是從ABCC6基因突變到外周組織的礦化沉積具體的發(fā)病機制尚不清楚。超過90%的PXE患者被證實有ABCC6基因突變，截至目前已發(fā)現(xiàn)的ABCC6基因突變位點有800余個，包括第ABCC6基因翻譯序列第1141位的一個無義突變和23-29區(qū)的大片缺失突變，這兩個突變約占了所有發(fā)現(xiàn)突變的40%。 隨著分子遺傳學技術的迅速發(fā)展，外顯子測序在醫(yī)學研究領域的應用越來越廣泛。大部分遺傳性疾病的致病性突變集中于約1%的外顯子區(qū)，這使得外顯子測序成為研究孟德爾疾病即單基因遺傳病的最簡捷、最常用的方法。本研究我們收集來自國內(nèi)9家醫(yī)院的29例彈力纖維假黃瘤患者，分析其臨床及病理特點，并通過外顯子測序技術對其中22例樣本合格的患者進行ABCC6基因突變位點檢測，利用SIFT和PolyPhen-2致病軟件預測突變的致病性，最終通過國際合作，利用小鼠模型和斑馬魚模型確定新發(fā)現(xiàn)的致病性突變。 目的 1.分析中國PXE患者的臨床與組織病理學特點； 2.檢測中國PXE患者ABCC6基因的突變位點，明確新的致病性突變。方法 1.回顧性調(diào)查29例PXE患者的臨床資料，并對其皮膚組織病理切片、彈力纖維染色、鈣染色等進行綜合觀察分析； 2.利用PCR方法，用正常人作對照，觀察每例患者有無文獻報告中常見的23-29區(qū)大片缺失的突變； 3.通過外顯子測序分析總結出22例PXE患者ABCC6基因突變位點； 4.利用SIFT prediction和PolyPhen-2prediction兩種軟件預測所有發(fā)現(xiàn)突變位點的致病性； 5.利用小鼠模型，通過免疫熒光觀察突變位點在小鼠肝細胞膜上或膜內(nèi)的表達情 況，驗證突變位點的致病性； 6.構建轉(zhuǎn)基因斑馬魚，根據(jù)突變載體能否糾正ABCC6基因缺失突變的斑馬魚情況，進一步明確突變位點的致病性。 結果 1.29例PXE患者中，男女性別比例為1:8.7，平均發(fā)病年齡（22.6±11.2）歲；發(fā)病部位頸部占29例（100%），腋窩占11例（37.9%），腹部占5例（17.2%）、腹股溝占4例（13.8%）；所有患者HE染色都可發(fā)現(xiàn)真皮膠原卷曲樣結構，彈力纖維染色可見到彈力纖維腫脹、斷裂、卷曲、變性，鈣染色可發(fā)現(xiàn)鈣的沉積；5例患者做了眼底及心血管的檢查，其中2例可見眼底血管條紋改變，較嚴重的1例發(fā)現(xiàn)眼底出血和視力受損，未發(fā)現(xiàn)心血管系統(tǒng)異常； 2.經(jīng)PCR檢測，所有患者均未發(fā)現(xiàn)23-29區(qū)大片缺失的突變； 3.新發(fā)現(xiàn)缺失或插入移碼突變5個，即：C.4254delG，C.30delG，C.196-197inT，C.3586delC，C.196delT，這些突變造成氨基酸改變或編碼終止，致病性明確； 4.利用SIFT prediction和PolyPhen-2prediction兩種軟件預測出兩類突變位點：1）軟件預測的明確致病突變位點：①C.1814TC（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/1）②C.373GA（SIFT：Damaging0.01，PolyPhen-2：probably/0.997）③C.11CA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.957）④C.1256GA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2： probably/0.994）⑤C.2843TC （SIFT： Damaging0， PolyPhen-2：probably/0.988）⑥C.2126AG（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.916）；2）軟件預測的致病可能性大的突變位點：①C.2501TC（SIFT：Tolerated0.28，PolyPhen-2：Benign/0.047）②C.61CT（SIFT：Tolerated0.45，PolyPhen-2：benign/0.209）③C.191GA（SIFT：Tolerated0.21，PolyPhen-2：benign/0.051④C.26CA（SIFT：Damaging0.02，PolyPhen-2：benign/0.109）； 5.通過小鼠模型，把上述軟件預測出的突變位點，通過免疫熒光觀察其表達位置：全部在小鼠肝細胞膜膜內(nèi)表達的突變位點：C.1814TC（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/1）；大部分在小鼠肝細胞膜膜內(nèi)表達的突變位點：C.1256GA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.994）；其余突變位點在小鼠肝細胞膜上有較多表達，致病可能性還有待進一步驗證及綜合分析； 6.通過構建轉(zhuǎn)基因斑馬魚，發(fā)現(xiàn)突變載體不能糾正ABCC6基因缺失的突變位點：①C.11CA（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.957）②C.1256GA（SIFT：Damaging0， PolyPhen-2： probably/0.994）③C.26CA （SIFT： Damaging0.02，PolyPhen-2： benign/0.109）④C.2843TC （SIFT： Damaging0， PolyPhen-2：probably/0.988）⑤C.2126AG（SIFT：Damaging0，PolyPhen-2：probably/0.916）⑥C.373GA（SIFT：Damaging0.01，PolyPhen-2：probably/0.997）⑦C.61CT（SIFT：Tolerated0.45，PolyPhen-2：benign/0.209）⑧C.2501TC（SIFT：Tolerated0.28，PoluPhen-2：Benign/0.047）；突變載體能夠部分糾正ABCC6基因缺失的突變位點：C.191GA（SIFT：Tolerated0.21，PolyPhen-2：benign/0.051）。 結論 1.收集的PXE患者以女性居多，發(fā)病年齡小，頸部、腋窩為最常見的發(fā)病部位；通過皮膚組織病理學檢查一般能及時做出診斷；對患者眼底和心血管系統(tǒng)并發(fā)癥檢查和積極地隨訪十分必要和重要； 2.歐美人群PXE患者常見的23-29區(qū)大片缺失的突變在我們所收集的樣本中均沒有被發(fā)現(xiàn)，23-29區(qū)大片缺失的突變可能不是中國漢族PXE患者的常見致病突變； 3.新發(fā)現(xiàn)5個中國漢族PXE患者ABCC6基因缺失或插入致病突變位點：C.4254delG，C.30delG，C.196＿197inT，C.3586delC，C.196delT； 4.利用動物模型鑒定出9個中國漢族PXE患者ABCC6基因新的致病錯義突變位點：C.1814TC，C.11CA，C.1256GA，C.26CA，C.2843TC，C.2126AG，C.373GAC.61CT，C.2501TC。
【關鍵詞】：彈力纖維假黃瘤 臨床表現(xiàn) 病理特征 ABCC6基因 突變 外顯子
【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R758.5
【目錄】：

• 縮略語表4-6
• 中文摘要6-10
• Abstract10-15
• 前言15-16
• 文獻回顧16-24
• 第一部分 中國彈力纖維假黃瘤臨床病理特征24-32
• 1 病例的收集與數(shù)據(jù)統(tǒng)計24-25
• 2 結果25-28
• 3 討論28-31
• 小結一31-32
• 第二部分 中國漢族 PXE 患者 ABCC6 基因新致病突變的研究32-57
• 1 實驗材料與儀器32-34
• 2 方法34-45
• 3 結果45-52
• 4 討論52-55
• 小結二55-57
• 參考文獻57-63
• 個人簡歷和研究成果63-64
• 致謝64-65

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 楊梅;;彈性纖維假黃瘤研究進展[J];銅陵職業(yè)技術學院學報;2009年04期

2 楊梅;高敏;肖風麗;周伏圣;方巧云;杜文輝;楊森;張學軍;;彈性纖維假黃瘤ABCC6基因突變檢測[J];安徽醫(yī)科大學學報;2008年02期

  本文關鍵詞：中國彈力纖維假黃瘤臨床病理特征與ABCC6基因新致病性突變的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：352898