目的探討miR-302b-3p靶向絲/蘇氨酸蛋白激酶（AKT）1調(diào)節(jié)皮膚成纖維細(xì)胞衰老的作用及其分子機(jī)制。方法建立復(fù)制性細(xì)胞衰老模型后,采用real-time PCR法檢測(cè)細(xì)胞miR-302b-3p的表達(dá)情況;采用生物信息學(xué)軟件分析miR-302b-3p的靶基因;分別將miR-302b-3p模擬物（mimic）及抑制劑（inhibitor）轉(zhuǎn)染皮膚成纖維細(xì)胞后,β-半乳糖苷酶染色分析細(xì)胞衰老情況,qRT-PCR法檢測(cè)AKT1 mRNA表達(dá)水平,Western印跡法檢測(cè)AKT1蛋白表達(dá)情況。結(jié)果與對(duì)照組比較,復(fù)制性衰老皮膚成纖維細(xì)胞中miR-302b-3p顯著升高。轉(zhuǎn)染miR-302b-3p mimic后,細(xì)胞衰老陽性染色細(xì)胞數(shù)目顯著增加（P<0.01）。AKT1為miR-302b-3p的預(yù)測(cè)靶基因。當(dāng)細(xì)胞上調(diào)miR-302b-3p表達(dá)時(shí),靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平顯著降低（P<0.05）。反之,當(dāng)細(xì)胞下調(diào)miR-302b-3p表達(dá)時(shí),靶基因AKT1 mRNA及蛋白水平顯著升高（P<0.05）。結(jié)論 miR-302b-3p可能通過靶向抑制AKT1表達(dá)調(diào)節(jié)皮膚成纖... 

【文章來源】：中國(guó)老年學(xué)雜志. 2020,40(07)北大核心

【文章頁(yè)數(shù)】：4 頁(yè)

【部分圖文】：

TARGETSCAN預(yù)測(cè)miR-302b-3p與靶基因的靶向結(jié)合示意圖

NC組,miR-302b-3p mimic 200 nmol/L、100 nmol/L、50 nmol/L組,miR-302b-3p inhibitor 100 nmol/L、200 nmol/L、300 nmol/L組AKT1蛋白表達(dá)量分別為:29.61±1.57、7.16±1.01、12.04±1.19、10.01±1.04、11.04±0.87、21.15±1.21、40.12±1.71。當(dāng)皮膚成纖維細(xì)胞上調(diào)miR-302b-3p的表達(dá)時(shí),AKT1蛋白表達(dá)顯著減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。當(dāng)皮膚成纖維細(xì)胞下調(diào)miR-302b-3p的表達(dá)時(shí),AKT1的蛋白表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01),而且呈現(xiàn)一定的劑量依賴性。見圖3。圖2 TARGETSCAN預(yù)測(cè)miR-302b-3p與靶基因的靶向結(jié)合示意圖

Western印跡檢測(cè)AKT1蛋白表達(dá)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]皮膚衰老和細(xì)胞衰老[J]. 符移才,金錫鵬.  臨床皮膚科雜志. 2000(04)



本文編號(hào)：3507720