目的分析沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）L₂血清型在急性感染和持續(xù)感染兩種狀態(tài)下,其基因CT259、CT703的mRNA及蛋白表達,為進一步研究兩基因的生物學效應奠定實驗基礎。方法1.用IFN-γ處理Ct感染的HeLa細胞,吉姆薩染色光學顯微鏡觀察、以及電鏡觀察,確定沙眼衣原體持續(xù)感染細胞模型建立。2.采用RT-PCR方法檢測基因CT259、CT703 mRNA在不同細胞模型中的表達。3.采用Western-blot的方法檢測基因CT259、CT703編碼蛋白在不同細胞模型中的表達。結果1.成功建立Ct持續(xù)感染細胞模型。2.RT-PCR結果顯示:Ct持續(xù)感染狀態(tài)下,在宿主細胞中6h開始檢測到CT259的表達,12小時開始檢測到CT703的表達,持續(xù)感染狀態(tài)下CT259、CT703的表達量無時間依賴性;Ct急性感染狀態(tài)下,在宿主細胞中6小時開始檢測到CT259的表達,12小時開始檢測到CT703的表達,隨感染時間的延長CT259、CT703 mRNA表達量逐漸增加,具時間依賴性。將持續(xù)感染與急性感染各相同時間點CT259、CT703 m... 

【文章來源】：中南大學湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

吉姆薩染色光學顯微鏡下觀察Ct感染HeLa細胞(放大倍數(shù):10x40)

碩士學位論文第二章結果dyeing.ArrowsindieatetheCt’5inelutions.A15oh，B15Ctinfeeted24hwithoutIFN一Y，C15Ctinfected48hwithoutIFN一Y，D15Ctinfeeted24hinelusionIFN一Y，andD15Ctinfeeted48hinclusionIFN一Y.2.1.2透射電鏡下檢測Ct包涵體在50cm2的細胞培養(yǎng)瓶內接種HeLa細胞，待細胞長成單層后加入1Mol的LZ型Ct。用不含IFN一y的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)ct感染的HeLa細胞，在感染后的24h、48h收集細胞，經(jīng)過處理，透射電鏡下觀察，可見:包涵體內出現(xiàn)大量的體積小、致密的EBS，少量RBs(如圖ZA、ZC)。用含0.2ng/mlIFN一Y的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)ct感染的HeLa細胞，在感染后的24h、48h收集細胞，經(jīng)過處理，透射電鏡下觀察到:包涵體內出現(xiàn)大量RBS，且RBs形態(tài)異常增大，疏松，不見成熟EBs(圖ZB、ZD)。

第二章結rueturalanalysisbyeleetronmieroseoPyofCt一infeetedHeLawsindieatetheEBsandthedoublearrowsindicatetheenlarge，5acuteinfection24h，B15acuteinfection48h，C15Persistentinfeetion24h，D15Persistentinfeetion48h.703mRNA的檢ffiIJ結果OD28。值在1.8一2.0之間，1.2%瓊脂糖凝膠電泳可觀察到條帶，表明抽提的RNA完整性較好(圖3)。aeuteinfeetjonPersistentjnfeCtjon(h)02612244826122448

【參考文獻】：
期刊論文
[1]沙眼衣原體感染Hela229細胞誘導SOCS-1,3的表達[J]. 魏秀青,程文,嚴杰,梅冰,霍治,余平.  中南大學學報(醫(yī)學版). 2004(06)
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本文編號：3496179