目的分析沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）L₂血清型在急性感染和持續(xù)感染兩種狀態(tài)下,其基因CT259、CT703的mRNA及蛋白表達(dá),為進(jìn)一步研究兩基因的生物學(xué)效應(yīng)奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法1.用IFN-γ處理Ct感染的HeLa細(xì)胞,吉姆薩染色光學(xué)顯微鏡觀察、以及電鏡觀察,確定沙眼衣原體持續(xù)感染細(xì)胞模型建立。2.采用RT-PCR方法檢測基因CT259、CT703 mRNA在不同細(xì)胞模型中的表達(dá)。3.采用Western-blot的方法檢測基因CT259、CT703編碼蛋白在不同細(xì)胞模型中的表達(dá)。結(jié)果1.成功建立Ct持續(xù)感染細(xì)胞模型。2.RT-PCR結(jié)果顯示:Ct持續(xù)感染狀態(tài)下,在宿主細(xì)胞中6h開始檢測到CT259的表達(dá),12小時(shí)開始檢測到CT703的表達(dá),持續(xù)感染狀態(tài)下CT259、CT703的表達(dá)量無時(shí)間依賴性;Ct急性感染狀態(tài)下,在宿主細(xì)胞中6小時(shí)開始檢測到CT259的表達(dá),12小時(shí)開始檢測到CT703的表達(dá),隨感染時(shí)間的延長CT259、CT703 mRNA表達(dá)量逐漸增加,具時(shí)間依賴性。將持續(xù)感染與急性感染各相同時(shí)間點(diǎn)CT259、CT703 m... 

【文章來源】：中南大學(xué)湖南省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：46 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

吉姆薩染色光學(xué)顯微鏡下觀察Ct感染HeLa細(xì)胞(放大倍數(shù):10x40)

碩士學(xué)位論文第二章結(jié)果dyeing.ArrowsindieatetheCt’5inelutions.A15oh，B15Ctinfeeted24hwithoutIFN一Y，C15Ctinfected48hwithoutIFN一Y，D15Ctinfeeted24hinelusionIFN一Y，andD15Ctinfeeted48hinclusionIFN一Y.2.1.2透射電鏡下檢測Ct包涵體在50cm2的細(xì)胞培養(yǎng)瓶內(nèi)接種HeLa細(xì)胞，待細(xì)胞長成單層后加入1Mol的LZ型Ct。用不含IFN一y的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)ct感染的HeLa細(xì)胞，在感染后的24h、48h收集細(xì)胞，經(jīng)過處理，透射電鏡下觀察，可見:包涵體內(nèi)出現(xiàn)大量的體積小、致密的EBS，少量RBs(如圖ZA、ZC)。用含0.2ng/mlIFN一Y的DMEM完全培養(yǎng)基培養(yǎng)ct感染的HeLa細(xì)胞，在感染后的24h、48h收集細(xì)胞，經(jīng)過處理，透射電鏡下觀察到:包涵體內(nèi)出現(xiàn)大量RBS，且RBs形態(tài)異常增大，疏松，不見成熟EBs(圖ZB、ZD)。

第二章結(jié)rueturalanalysisbyeleetronmieroseoPyofCt一infeetedHeLawsindieatetheEBsandthedoublearrowsindicatetheenlarge，5acuteinfection24h，B15acuteinfection48h，C15Persistentinfeetion24h，D15Persistentinfeetion48h.703mRNA的檢ffiIJ結(jié)果OD28。值在1.8一2.0之間，1.2%瓊脂糖凝膠電泳可觀察到條帶，表明抽提的RNA完整性較好(圖3)。aeuteinfeetjonPersistentjnfeCtjon(h)02612244826122448

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]沙眼衣原體感染Hela229細(xì)胞誘導(dǎo)SOCS-1,3的表達(dá)[J]. 魏秀青,程文,嚴(yán)杰,梅冰,霍治,余平.  中南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2004(06)
[2]沙眼衣原體感染對HeLa細(xì)胞MHCⅠ、Ⅱ類分子表達(dá)的影響[J]. 余俊龍,唐發(fā)清,李立新,舒明星,余平.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2004(01)
[3]沙眼衣原體感染細(xì)胞中IFN-γ信號(hào)通路的初步研究[J]. 張小清,李建平,余平.  微生物學(xué)雜志. 2003(02)



本文編號(hào)：3496179