本文關(guān)鍵詞：熱處理對黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞α-MSH分泌變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的 黑素細(xì)胞功能活性的增強(qiáng)與眾多細(xì)胞因子有關(guān)，其中阿黑皮素原（proopiomelanocortin，POMC）剪切后的α-黑素細(xì)胞刺激素（α-melanocyte-stimulatingHormone,α-MSH）是其中重要的一員。除黑素細(xì)胞外，與黑素細(xì)胞共同形成表皮黑素單元的角質(zhì)形成細(xì)胞也可產(chǎn)生α-MSH。前期研究發(fā)現(xiàn)，熱處理有引起皮膚色素沉著的積極作用，本實驗研究熱處理后人表皮黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞（人永生化的角質(zhì)形成細(xì)胞）POMCmRNA及α-MSH蛋白的變化，進(jìn)一步討論熱處理引起黑素細(xì)胞功能活性增強(qiáng)的調(diào)節(jié)機(jī)制。為了驗證熱處理通過α-MSH分泌的變化引起黑素細(xì)胞功能活性的增強(qiáng)，我們建立黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞的共培養(yǎng)模型，模擬體內(nèi)黑素細(xì)胞生存環(huán)境；并在熱處理前，在共培養(yǎng)模型中加入α-MSH抗體，測共培養(yǎng)模型中黑素含量及酪氨酸酶活性的變化。 方法 1.體外培養(yǎng)的黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞，分別給予熱處理（42℃，每天60min,連續(xù)3d），采用實時熒光定量PCR法(real-timePCR,RT-PCR)檢測兩種細(xì)胞的POMCmRNA的變化，酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測兩種細(xì)胞分泌的α-MSH蛋白的變化。 2.建立黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞的共培養(yǎng)模型。 3.熱處理前,在共培養(yǎng)模型中加入α-MSH抗體，熱處理3天后，NAOH法測共培養(yǎng)模型中黑素含量，左旋多巴法（L-Dopa）測酪氨酸酶活性。 結(jié)果 1.分別熱處理（42℃，每天60min,連續(xù)3d）黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞，RT-PCR法測POMCmRNA，結(jié)果黑素細(xì)胞加熱組的POMCmRNA（1.24206±0.33464）較對照組（1.000）有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），HaCaT細(xì)胞加熱組POMCmRNA（1.4087±0.038626）較對照組（1.000）有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 2.用ELISA法測黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞胞漿α-MSH蛋白的表達(dá)變化，結(jié)果顯示黑素細(xì)胞加熱組α-MSH（0.1636±0.00054）較對照組（0.1629±0.00040）有顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），HaCaT細(xì)胞加熱組α-MSH蛋白（0.1655±0.00040）較對照組（0.1650±0.00047）有統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05）。 3.建立黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞的共培養(yǎng)模型，分為5組。熱處理前，向各組中分別加入α-MSH抗體0、10-9、10-8、10-7、10-6mol/L。發(fā)現(xiàn)，加入α-MSH抗體后黑素含量較對照組（0.1958±0.1898），，分別為0.1915±0.01013、0.1565±0.00550、0.0870±0.00303、0.1693±0.01829；加入10-9mol/L組與對照組無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），加入10-8和10-6mol/L組均較對照組有下降（P0.05），但組間無統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），加入10-7mol/L組黑素含量下降最顯著（P0.001）。酪氨酸酶活性較對照組（0.2086±0.02011）相比，分別為0.1238±0.02034、0.0870±0.01454、0.0424±0.01036、0.0834±0.01126；其中加入10-7mol/L組酪氨酸酶活性最低（P0.001），加入10-8和10-6mol/L組間無顯著統(tǒng)計學(xué)差異（P0.05），而加入10~(-9)mol/L組酪氨酸酶活性較對照組也是降低的（P0.05）。 結(jié)論 1.熱處理（42℃,1h,3d）可顯著增加黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞內(nèi)POMCmRNA含量。 2.熱處理（42℃,1h,3d）可顯著增加黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞胞漿中α-MSH蛋白的含量。 3.加入α-MSH抗體后，熱處理并不能提高共培養(yǎng)模型中黑素含量及酪氨酸酶活性；黑素含量和酪氨酸酶活性在10-7mmol/L時抑制作用最強(qiáng)。
【關(guān)鍵詞】：熱處理 黑素細(xì)胞 HaCaT細(xì)胞 POMC α-MSH 黑素含量 酪氨酸 酶活性
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R751
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-10
• 英文摘要10-13
• 前言13-15
• 文獻(xiàn)回顧15-24
• 1 材料24-26
• 1.1 研究對象24
• 1.2 主要儀器設(shè)備和試劑24-25
• 1.3 主要試劑配制25-26
• 2 方法26-32
• 2.1 人黑素細(xì)胞的原代培養(yǎng)26
• 2.2 黑素細(xì)胞的傳代26-27
• 2.3 細(xì)胞的凍存及復(fù)蘇27
• 2.4 HaCaT細(xì)胞培養(yǎng)方法27
• 2.5 實驗分組與干預(yù)27-30
• 2.6 建立黑素細(xì)胞與HaCaT細(xì)胞共培養(yǎng)模型30-31
• 2.7 不同αMSH抗體濃度干預(yù)后共培養(yǎng)模型中黑素含量的測定31
• 2.8 不同αMSH抗體濃度干預(yù)后共培養(yǎng)模型中酪氨酸酶活性的測定31-32
• 2.9 統(tǒng)計學(xué)處理32
• 3 結(jié)果32-35
• 3.1 熱處理黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞核內(nèi)POMC合成的影響32
• 3.2 熱處理黑素細(xì)胞及HaCaT細(xì)胞胞漿αMSH合成的影響32-33
• 3.3 加入αMSH抗體對共培養(yǎng)模型黑素含量的影響33
• 3.4 加入αMSH抗體對共培養(yǎng)模型酪氨酸酶活性的影響33-35
• 4 討論35-40
• 小結(jié)40-41
• 參考文獻(xiàn)41-46
• 個人簡歷和研究成果46-47
• 致謝47

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  本文關(guān)鍵詞：熱處理對黑素細(xì)胞和HaCaT細(xì)胞α-MSH分泌變化的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：348812