目的在銀屑病和正常對照者的皮膚組織、表皮角質(zhì)形成細胞（KC）中比較轉(zhuǎn)錄因子特殊蛋白（Sp1）的差異性表達,驗證其與銀屑病的相關性并初步探討其臨床意義。方法采用免疫組化染色法、實時熒光定量PCR技術、Western blot檢測尋常型銀屑病組與對照組皮膚組織中Sp1在mRNA水平及蛋白水平的表達差異及分布情況;采用基因敲降技術對Hacat細胞中的Sp1基因處理后,檢測細胞的增殖功能。結(jié)果免疫組化染色顯示Sp1在銀屑病組較對照組表達高,銀屑病組廣泛表達于表皮各層細胞核,以棘層和基底層為主。分子研究顯示銀屑病組Sp1在mRNA水平及蛋白水平表達量高于對照組（P<0.05）。對處理后Hacat細胞行絕對細胞計數(shù)法和CCK-8計數(shù)法,敲低組細胞生長緩慢,細胞數(shù)量減少,提示Sp1可促進角質(zhì)形成細胞增殖。結(jié)論 Sp1與尋常型銀屑病的發(fā)病可能存在相關性,尋常型銀屑病患者皮損中Sp1表達水平的增高可能通過促進角質(zhì)形成細胞增殖作用參與銀屑病的發(fā)病過程,同時Sp1的表達情況可為評價銀屑病生物學行為和治療有效性提供一定參考價值。 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學學報. 2020,55(10)北大核心

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【部分圖文】：

銀屑病組和對照組皮組織Sp1的表達

由于銀屑病原代KC培養(yǎng)困難,故使用Hacat細胞系替代(永生化非腫瘤性KC,為目前公認可替代KC完成功能實驗的細胞系)。通過siRNA基因敲降技術降低Hacat細胞Sp1的表達(圖3A),并應用Western blot檢測證實Sp1表達已被成功敲降,最后采用CCK-8計數(shù)法統(tǒng)計實驗組和對照組的細胞數(shù)量(圖3B),采用絕對細胞計數(shù)法記錄各組之間Hacat細胞的生長曲線(圖3C),結(jié)果表明實驗組Hacat細胞增殖功能受到抑制,Sp1的表達降低能夠抑制Hacat細胞的增殖,即反向證明Sp1可影響角質(zhì)形成細胞增殖。本實驗兩組間差異具有統(tǒng)計學意義。3 討論

銀屑病是一種多基因參與的紅斑鱗屑性皮膚病,通過免疫介導的多條通路最終引起KC增殖的慢性炎癥性免疫性疾病。其病理特征為表皮角化過度和角化不全、棘層增厚、真皮炎癥[7]。銀屑病的發(fā)病機制累及多環(huán)節(jié)多通路,目前普遍認為IFN-γ/TNF-Th1軸在銀屑病的發(fā)病中起重要作用[8]。TNF直接或間接誘導產(chǎn)生IFN-γ,后者通過與相應受體結(jié)合啟動3條主要的免疫調(diào)控通路:NF-Kappa B活化和炎癥的產(chǎn)生;MAPK(促分裂元活化蛋白激酶)通路活化KC的分化增殖、細胞的死亡信號,從而在同一個細胞內(nèi)通過凋亡和抗凋亡信號共同調(diào)節(jié),引起多種調(diào)控KC生長分化的細胞因子異常表達,導致免疫介導下KC過度增殖最終發(fā)生銀屑病[9]。Sp1是Sp家族的重要成員之一,其成員與3個相鄰的Cys2His2型鋅指共享高度保守的DBD(序列同一性超過65%),因此它們以重疊的特異性和親和力結(jié)合到GC或GT盒上。其成員包括Sp1、Sp3、Sp4,其中Sp1在人體皮膚、子宮等組織內(nèi)呈結(jié)構(gòu)性表達,許多管家基因及組織特異性基因的啟動子區(qū)域因富含GC序列而受Sp1調(diào)控。其參與細胞生長和凋亡、細胞周期發(fā)展、血管生成和轉(zhuǎn)移等生理過程[10],是細胞周期的關鍵調(diào)控因子[11]。研究[12]表明腫瘤壞死因子α(tumour necrosis factor α,TNFα)的表達可通過SP家族中Sp1和Sp3相互作用而調(diào)控,尤其是Sp1的正向調(diào)控起主要作用。其在胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌和肺癌等多種腫瘤中特異性高表達,與腫瘤的浸潤和轉(zhuǎn)移密切相關,其表達強度與腫瘤患者的愈后呈正相關[13]。目前對于Sp1在銀屑病中發(fā)揮的作用仍然知之甚少。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]銀屑病發(fā)病機制相關信號通路研究進展[J]. 姜蔚蔚,張春雷.  中國麻風皮膚病雜志. 2018(06)



本文編號：3459406