研究背景毛發(fā)具有十分重要的生理學(xué)和社會(huì)學(xué)的價(jià)值,而脫發(fā)一直是醫(yī)學(xué)界的一大難題。為此全球各大醫(yī)藥公司每年投入大量的人力物力以尋求治療脫發(fā)的有效療法。盡管如此,可供選擇的治療手段依然十分有限,而毛囊相關(guān)的研究主要受限于缺乏安全高效的藥物篩選系統(tǒng)。類器官作為一種由干細(xì)胞為原料,經(jīng)體外培養(yǎng)自我組裝成的三維結(jié)構(gòu),具有與實(shí)際器官相似的特征及功能,為研究器官發(fā)育、組織再生及疾病發(fā)病機(jī)理提供了新的可能。近年來(lái),已成功培育多種上皮類器官,例如乳腺,唾液腺以及結(jié)腸和肝管,但是在體外培育毛囊類器官仍是一大難題,本研究通過體外懸浮共培養(yǎng)頭皮真皮祖細(xì)胞及表皮干細(xì)胞形成具有毛囊早期發(fā)育特征的真皮-表皮細(xì)胞聚集體,探究了 WNT信號(hào)通路在毛囊類器官形成過程中的作用,并通過體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)其促生發(fā)能力,為實(shí)現(xiàn)高效培育毛囊類器官提供了新的途徑。實(shí)驗(yàn)?zāi)康?.通過構(gòu)建真皮祖細(xì)胞和表皮干細(xì)胞的三維聚集體探索體外培育毛囊類器官的實(shí)驗(yàn)方法。2.對(duì)成功構(gòu)建的毛囊類器官進(jìn)行組織學(xué)及遺傳學(xué)評(píng)估。3.探究WNT信號(hào)通路在毛囊類器官形成早期發(fā)揮的作用。4.探究培育的毛囊類器官在移植后是否可以有效促進(jìn)毛發(fā)生成。實(shí)驗(yàn)方法1.依照本課題組創(chuàng)立的“一... 

【文章來(lái)源】：山東大學(xué)山東省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：60 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

圖１．１原代表皮細(xì)胞生長(zhǎng)狀況（１０〇ｘ）??Ａ．原代表皮細(xì)胞分離并培養(yǎng)２天后光鏡下圖；Ｂ．原代表皮細(xì)胞分離并培養(yǎng)７天后光鏡下圖??

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???ａ?３?ｄａｙｓ?ｇ?１４?ｄａｙｓ??—■??圖１．２?Ｐ２代表皮細(xì)胞的克隆形成??Ａ．Ｐ２代表皮細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)培育３天后光鏡下圖：Ｂ．Ｐ２代表皮細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)培育丨４天??后光鏡下圖；標(biāo)尺＝丨〇〇?ｐｍ??１．３．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)獲取的表皮細(xì)胞表達(dá)表皮干細(xì)胞表面標(biāo)志物《６－??ｉｎｔｅｇｒｉｎ??表皮干細(xì)胞通常高表達(dá)ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ，因此ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ常作為表皮干細(xì)胞的標(biāo)??志物。如圖１．３所示，在所獲得的Ｐ２代表皮細(xì)胞中，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析顯示９５％??以上的表皮細(xì)胞高表達(dá)ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ，空白對(duì)照組表皮細(xì)胞基本檢測(cè)不到ａ６－??ｉｎｔｅｇｒｉｎ的表達(dá)。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)中所分離及傳代培養(yǎng)的表皮細(xì)胞??是表皮干細(xì)胞。??Ａ?Ｂ??Ｉ?備§１???Ｘ??Ｉ?Ｉ?！？？?Ｉ??ｉｌｒｉ?ＬＪｄ??１〇２?１〇３?ｔｏ４?１０５?１０？??ＦＩＴＣ－Ａ?ＦＩＴＣ－Ａ??圖１．３流式細(xì)胞術(shù)示表皮干細(xì)胞標(biāo)志物（１６－ｉｒｉｔｅｇｒｉｎ的表達(dá)??Ａ．空白對(duì)照組中ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ陽(yáng)性表皮細(xì)胞的比例；Ｂ／矣驗(yàn)組中ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ陽(yáng)性表皮細(xì)胞的比??例??２．頭皮真皮祖細(xì)胞的鑒定??２．１．真皮祖細(xì)胞的培養(yǎng)??如圖１．４所示，取不同來(lái)源的Ｐ３代真皮祖細(xì)胞復(fù)蘇并培養(yǎng)３天后可見真皮袓??１１??

?山東大學(xué)碩士學(xué)位論文???ａ?３?ｄａｙｓ?ｇ?１４?ｄａｙｓ??—■??圖１．２?Ｐ２代表皮細(xì)胞的克隆形成??Ａ．Ｐ２代表皮細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)培育３天后光鏡下圖：Ｂ．Ｐ２代表皮細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)培育丨４天??后光鏡下圖；標(biāo)尺＝丨〇〇?ｐｍ??１．３．流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)發(fā)現(xiàn)獲取的表皮細(xì)胞表達(dá)表皮干細(xì)胞表面標(biāo)志物《６－??ｉｎｔｅｇｒｉｎ??表皮干細(xì)胞通常高表達(dá)ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ，因此ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ常作為表皮干細(xì)胞的標(biāo)??志物。如圖１．３所示，在所獲得的Ｐ２代表皮細(xì)胞中，經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)分析顯示９５％??以上的表皮細(xì)胞高表達(dá)ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ，空白對(duì)照組表皮細(xì)胞基本檢測(cè)不到ａ６－??ｉｎｔｅｇｒｉｎ的表達(dá)。這一結(jié)果進(jìn)一步證實(shí)了本實(shí)驗(yàn)中所分離及傳代培養(yǎng)的表皮細(xì)胞??是表皮干細(xì)胞。??Ａ?Ｂ??Ｉ?備§１???Ｘ??Ｉ?Ｉ?�。�？?Ｉ??ｉｌｒｉ?ＬＪｄ??１〇２?１〇３?ｔｏ４?１０５?１０？??ＦＩＴＣ－Ａ?ＦＩＴＣ－Ａ??圖１．３流式細(xì)胞術(shù)示表皮干細(xì)胞標(biāo)志物（１６－ｉｒｉｔｅｇｒｉｎ的表達(dá)??Ａ．空白對(duì)照組中ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ陽(yáng)性表皮細(xì)胞的比例；Ｂ／矣驗(yàn)組中ａ６－ｉｎｔｅｇｒｉｎ陽(yáng)性表皮細(xì)胞的比??例??２．頭皮真皮祖細(xì)胞的鑒定??２．１．真皮祖細(xì)胞的培養(yǎng)??如圖１．４所示，取不同來(lái)源的Ｐ３代真皮祖細(xì)胞復(fù)蘇并培養(yǎng)３天后可見真皮袓??１１??


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