銀屑病是一種常見的慢性炎癥性皮膚疾病。銀屑病患者皮疹一般全身泛發(fā)且通常伴隨有瘙癢癥狀,對(duì)患病個(gè)體的生活質(zhì)量可造成不小的影響。銀屑病可分為多種類型,最常見的是斑塊型銀屑病,這種類型銀屑病典型的皮膚損害表現(xiàn)為境界清楚的紅色斑塊,表面覆蓋較厚的白色鱗屑。銀屑病皮膚損害的病理學(xué)表現(xiàn)包括表皮棘層不規(guī)則增厚、真皮淺層血管擴(kuò)張充血和炎癥性細(xì)胞的浸潤等。銀屑病很多的治療方案療效不盡人意。G蛋白耦聯(lián)受體（G-protein coupled receptors,GPCRs）超家族是目前最大的與信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)相關(guān)的細(xì)胞表面分子家族。趨化因子受體是控制白細(xì)胞運(yùn)輸?shù)囊环NG蛋白耦聯(lián)受體,正如大多數(shù)G蛋白耦聯(lián)受體一樣,趨化因子是一種很好的潛在藥物靶點(diǎn)。已有研究發(fā)現(xiàn)大量的趨化因子和趨化因子受體在銀屑病皮損區(qū)的表達(dá)較無皮損區(qū)皮膚明顯增多,但是G蛋白耦聯(lián)受體是否在銀屑病發(fā)病過程中發(fā)揮重要作用還不清楚。本研究利用基因芯片檢測(cè)技術(shù)和實(shí)時(shí)定量PCR的方法找出3例斑塊型銀屑病患者受累皮膚組織和非受累皮膚組織中與G蛋白耦聯(lián)受體相關(guān)的大于2倍差異基因。其中,實(shí)時(shí)定量PCR用于驗(yàn)證基因芯片的檢測(cè)結(jié)果。我們的研究目的是從基因水平上探討G蛋白耦... 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：65 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

Agilent表達(dá)譜芯片技術(shù)流程

注：利用基因芯片技術(shù)對(duì)銀屑病患者的銀屑病皮損和未受累皮膚組織進(jìn)行差異基因的過程交由歐易生物醫(yī)學(xué)科技有限公司完成。3、銀屑病患者 3 對(duì)皮膚組織的 RNA 提取及 RNA 逆轉(zhuǎn)錄形成 cDNA：3.1 實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組共 3 對(duì)皮膚組織的 RNA 提�。海�1）實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：從-80℃冰箱中取出實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組 3 位銀屑病患者的組織（實(shí)驗(yàn)組為 Ia/IIa/IIIa，對(duì)照組為 Ib/IIb/IIIb），用電子天平分別將每塊稱取約 0.05g 放入容積為 1.5ml 的 EP 管中，將 6 個(gè) EP 管置于液氮中速凍后的速度使用移液器按比例加入 0.5mlTrizol 溶液，用眼科剪盡可能剪碎皮膚著使用電動(dòng)勻漿機(jī)充分勻漿。將 6 管皮膚組織放置于 4℃環(huán)境中過夜。注意：在提取 RNA 時(shí)要盡可能防止 RNA 酶污染樣品，提前制備滅活的 DE驗(yàn)操作時(shí)帶好一次性手套和一次性口罩，將 RNA 酶滅活劑噴灑于實(shí)驗(yàn)用圖 1：Agilent 表達(dá)譜芯片技術(shù)流程圖 2：Agilent 表達(dá)譜芯片分析流程

圖 3：本次實(shí)驗(yàn)課題研究的流程圖根據(jù)以上實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蛯?shí)驗(yàn)方法，將實(shí)驗(yàn)流程整理如下：在皮膚科門診收集床病例，均為典型尋常型銀屑病患者（記錄年齡，病史，PASI 評(píng)分和用藥情取這3位銀屑病患者的典型銀屑病皮損和未受累皮膚組織共3對(duì)，進(jìn)行基因芯片得出 2 倍以上差異基因。整理基因芯片數(shù)據(jù)，得出基因芯片篩選結(jié)果，找出其的 GPCR 家族成員。RT-PCR 驗(yàn)證基因芯片篩選結(jié)果，確定 GPCR 家族中影響發(fā)病的成員。利用 5%咪喹莫特軟膏（明欣利迪，四川明欣藥業(yè)）30mg 均勻用于小鼠剃毛后的背部皮膚共 7 天后，建立銀屑病小鼠模型，取小鼠背部銀屑提取組織 RNA，逆轉(zhuǎn)錄為 cDNA 后同樣行 RT-PCR 驗(yàn)證上述基因芯片篩選結(jié)是否和人皮膚組織驗(yàn)證結(jié)果一致，以期日后可利用小鼠銀屑病模型行進(jìn)一步究，尋找銀屑病的基因治療靶點(diǎn)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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