發(fā)布時間：2021-08-21 00:33

　　目的研究DEAD盒解旋酶10 （DDX10）對黑素瘤缺失基因2（AIM2）炎性體通路的調(diào)控機(jī)制。方法通過在HEK293T-caspase-1-ASC-IL-1β（HEK293T-CIA）細(xì)胞系中過表達(dá)DDX家族成員和AIM2表達(dá)質(zhì)粒,檢測上清中的白細(xì)胞介素1β（IL-1β）的釋放,篩選對AIM2炎性體通路有調(diào)控作用的分子。在DDX10缺失的THP-1細(xì)胞系,利用佛波酯（PMA）誘導(dǎo)分化為巨噬細(xì)胞,用脂多糖（LPS）預(yù)處理,再用poly（dA:dT）刺激巨噬細(xì)胞激活A(yù)IM2炎性體。采用ELISA檢測IL-1β的釋放, Western blot法檢測胱天蛋白酶1（caspase-1）蛋白的切割和DDX10蛋白水平。采用免疫共沉淀法檢測DDX10和AIM2的相互作用,利用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)染色法結(jié)合共聚焦顯微鏡技術(shù)確定DDX10和AIM2在HEK293T細(xì)胞的共定位情況。結(jié)果過表達(dá)DDX10顯著促進(jìn)AIM2炎性體通路的激活,缺失DDX10顯著降低AIM2炎性體通路的激活, DDX10與AIM2的帶有200個氨基酸重復(fù)序列的造血性干擾素誘導(dǎo)核蛋白（HIN-200）結(jié)構(gòu)域存在相互作用,并增強(qiáng)AIM... 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2020,36(04)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

DDX家族成員表達(dá)載體的鑒定以及ELISA檢測過表達(dá)DDX家族成員分子后IL-1β在HEK293-CIA細(xì)胞上清的釋放量

為了進(jìn)一步確認(rèn)DDX10在AIM2炎性體的調(diào)控功能, 我們在DDX10敲除(knockout of DDX10, DDX10-/-)的THP-1細(xì)胞上進(jìn)行AIM2炎性體功能實驗。首先通過Western blot法檢測分析確定內(nèi)源性DDX10在DDX10-/- THP-1細(xì)胞系中被有效敲除(圖3A)。 與野生型(wide type, WT) THP-1相比, DDX10-/- THP-1在poly(dA: dT)刺激下表現(xiàn)出更少的IL-1β的分泌(圖3B)和caspase-1活化(圖3C)。 利用敲除細(xì)胞系驗證了, 缺失DDX10水平顯著抑制AIM2炎性體通路的激活。與DDX10促進(jìn)AIM2炎性體通路的激活這一現(xiàn)象相一致的是, 缺失DDX10負(fù)向調(diào)控AIM2炎性體通路的激活。圖3 DDX10敲除顯著抑制AIM2炎性體通路的激活

DDX10敲除顯著抑制AIM2炎性體通路的激活


本文編號：3354519