隨著對腫瘤干細胞研究的不斷深入,越來越多的證據提示腫瘤中某些細胞具有干細胞特性,并提出了腫瘤干細胞的學說,該學說的一個關鍵點是細胞微環(huán)境（cell niche）的改變是干細胞分化受阻的主要原因。在本研究中我們首先探討黑色素瘤A-375細胞對表皮干細胞的誘導作用,建立體外誘導表皮干細胞惡性轉化的共培養(yǎng)模型,發(fā)現(xiàn)表皮干細胞經黑色素瘤細胞直接誘導后,具有腫瘤細胞的相關生物學特性,這為腫瘤微環(huán)境可以造成干細胞自我更新能力的失控提供了一定的依據。基于此基礎上,我們進一步研究了黑色素瘤細胞對潛在致癌的表皮干細胞的誘導作用,通過腫瘤相關抗原檢測利裸鼠功能試驗證明潛在致癌的表皮干細胞經黑色素瘤細胞誘導后可致裸鼠黑色素瘤。最后初步探討表皮干細胞向間質細胞轉型的機制,主要針對TGF-B信號通路及其下游分子p-smad2/3和E-cadherin的關系在表皮干細胞EMT過程中的作用及其機制的研究。 

【文章來源】：中國人民解放軍海軍軍醫(yī)大學上海市 211工程院校

【文章頁數】：87 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

-375的培養(yǎng)和鑒定

該共培養(yǎng)體系及 HEMSC 單獨培養(yǎng)對照組中 A375 和 HEESC 的數量在各時間點（1-7d）間無顯著變化（見圖3）。相差顯微鏡下觀察到接觸共培養(yǎng)組在共培養(yǎng) 4d 時有克隆出現(xiàn)，7d 時可見明顯的克��；共培養(yǎng) 7d 后的 HEESC 于正常培養(yǎng)基培養(yǎng)中貼壁后可見部分細胞變?yōu)樗笮�，這說明 A-375 誘導后 HEESC 接觸抑制開始喪失，而在其他兩組未觀察到此現(xiàn)象（圖 3）。在 1、3、5、7d 用免疫熒光法檢測各組 HEESC 中 E-cadherin 和 p53 表達情況。結果表明接觸共培養(yǎng)組中 A-375 誘導后 HEESC 表達 E－鈣粘蛋白的圖 2 HEESC 的培養(yǎng)和鑒定A：相差顯微鏡下 30-50%匯合的 HEMSC；B：相差顯微鏡下單層匯合的 HEMSC；C：免疫熒光法檢測 HEESC 中 p63；D：免疫熒光法檢測 HEESC 中β1-integrin；Fig 2 Culture and identification of HEESCA：30-50% confluent HEESC, under phase-contrast microscope；B：confluent HEESC, under phase-contrast microscope；C：p63n in HEMSC detected by immunofluorescence method；D：β1-integrin detected by immunofluorescence method

表 3：統(tǒng)計學方法分析不同時間點 E-cadherin 的蛋白表達情況表 4：統(tǒng)計學方法分析不同時間點 PCNA 的蛋白表達情況Lane E-G：indirect contact co-cultured HEMSC in in 3d，5d and 7d sequentially；LaneH：DMBA treated HEESC00.20.40.60.811.2A B C D E F G H00.10.20.30.40.5


本文編號：3272207