隨著對(duì)腫瘤干細(xì)胞研究的不斷深入,越來(lái)越多的證據(jù)提示腫瘤中某些細(xì)胞具有干細(xì)胞特性,并提出了腫瘤干細(xì)胞的學(xué)說(shuō),該學(xué)說(shuō)的一個(gè)關(guān)鍵點(diǎn)是細(xì)胞微環(huán)境（cell niche）的改變是干細(xì)胞分化受阻的主要原因。在本研究中我們首先探討黑色素瘤A-375細(xì)胞對(duì)表皮干細(xì)胞的誘導(dǎo)作用,建立體外誘導(dǎo)表皮干細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的共培養(yǎng)模型,發(fā)現(xiàn)表皮干細(xì)胞經(jīng)黑色素瘤細(xì)胞直接誘導(dǎo)后,具有腫瘤細(xì)胞的相關(guān)生物學(xué)特性,這為腫瘤微環(huán)境可以造成干細(xì)胞自我更新能力的失控提供了一定的依據(jù)。基于此基礎(chǔ)上,我們進(jìn)一步研究了黑色素瘤細(xì)胞對(duì)潛在致癌的表皮干細(xì)胞的誘導(dǎo)作用,通過(guò)腫瘤相關(guān)抗原檢測(cè)利裸鼠功能試驗(yàn)證明潛在致癌的表皮干細(xì)胞經(jīng)黑色素瘤細(xì)胞誘導(dǎo)后可致裸鼠黑色素瘤。最后初步探討表皮干細(xì)胞向間質(zhì)細(xì)胞轉(zhuǎn)型的機(jī)制,主要針對(duì)TGF-B信號(hào)通路及其下游分子p-smad2/3和E-cadherin的關(guān)系在表皮干細(xì)胞EMT過(guò)程中的作用及其機(jī)制的研究。 

【文章來(lái)源】：中國(guó)人民解放軍海軍軍醫(yī)大學(xué)上海市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：87 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

-375的培養(yǎng)和鑒定

該共培養(yǎng)體系及 HEMSC 單獨(dú)培養(yǎng)對(duì)照組中 A375 和 HEESC 的數(shù)量在各時(shí)間點(diǎn)（1-7d）間無(wú)顯著變化（見(jiàn)圖3）。相差顯微鏡下觀察到接觸共培養(yǎng)組在共培養(yǎng) 4d 時(shí)有克隆出現(xiàn)，7d 時(shí)可見(jiàn)明顯的克�。还才囵B(yǎng) 7d 后的 HEESC 于正常培養(yǎng)基培養(yǎng)中貼壁后可見(jiàn)部分細(xì)胞變?yōu)樗笮�，這說(shuō)明 A-375 誘導(dǎo)后 HEESC 接觸抑制開(kāi)始喪失，而在其他兩組未觀察到此現(xiàn)象（圖 3）。在 1、3、5、7d 用免疫熒光法檢測(cè)各組 HEESC 中 E-cadherin 和 p53 表達(dá)情況。結(jié)果表明接觸共培養(yǎng)組中 A-375 誘導(dǎo)后 HEESC 表達(dá) E－鈣粘蛋白的圖 2 HEESC 的培養(yǎng)和鑒定A：相差顯微鏡下 30-50%匯合的 HEMSC；B：相差顯微鏡下單層匯合的 HEMSC；C：免疫熒光法檢測(cè) HEESC 中 p63；D：免疫熒光法檢測(cè) HEESC 中β1-integrin；Fig 2 Culture and identification of HEESCA：30-50% confluent HEESC, under phase-contrast microscope；B：confluent HEESC, under phase-contrast microscope；C：p63n in HEMSC detected by immunofluorescence method；D：β1-integrin detected by immunofluorescence method

表 3：統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析不同時(shí)間點(diǎn) E-cadherin 的蛋白表達(dá)情況表 4：統(tǒng)計(jì)學(xué)方法分析不同時(shí)間點(diǎn) PCNA 的蛋白表達(dá)情況Lane E-G：indirect contact co-cultured HEMSC in in 3d，5d and 7d sequentially；LaneH：DMBA treated HEESC00.20.40.60.811.2A B C D E F G H00.10.20.30.40.5


本文編號(hào)：3272207