目的:通過(guò)溫度試驗(yàn)等表型方法分離都柏林念珠菌,同時(shí)建立一種簡(jiǎn)單、可靠、快速的基因型鑒定方法,并調(diào)查本地區(qū)性病門(mén)診生殖器念珠菌病患者都柏林念珠菌的感染率。 方法:收集了2002年10月～2005年3月期間到天津市性傳播疾病研究所門(mén)診就診的生殖器念珠菌病的400例臨床菌株和北京大學(xué)真菌和真菌病研究中心饋贈(zèng)的白念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株ATCC-11006、都柏林念珠菌標(biāo)準(zhǔn)菌株CBS—8501作為樣本,所有臨床菌株均經(jīng)過(guò)表型方法鑒定為原白念珠菌（包括白念珠菌和都柏林念珠菌）。首先將上述402例菌株活化兩次后進(jìn)行45℃溫度試驗(yàn)。然后,將45℃溫度試驗(yàn)中生長(zhǎng)不良的待檢菌株沙氏液體培養(yǎng)基增菌,尿素裂解液對(duì)菌細(xì)胞裂解,異丙醇沉淀法制備DNA模板,采用PCR的方法對(duì)核糖體DNA內(nèi)部轉(zhuǎn)錄間隔區(qū)ITS的編碼基因進(jìn)行核酸擴(kuò)增。最后用HpyF10VI酶切PCR產(chǎn)物,8%聚丙酰胺凝膠垂直電泳后紫外線燈下觀察帶型。 結(jié)果:經(jīng)過(guò)3遍溫度試驗(yàn)后,41例臨床菌株和1例都柏林念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株幾乎無(wú)生長(zhǎng)。PCR產(chǎn)物酶切后進(jìn)行8%聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳,顯示2種帶型,1種帶型示3條條帶,在100～200bp之間有2條條帶,在20... 

【文章來(lái)源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：53 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

沙堡羅固體培養(yǎng)皿45℃溫度試驗(yàn)后的菌落生長(zhǎng)情況

12345678凝膠水平電泳圖。泳道l:DNAmarkor(100，200，300，400，500，15003、4:白念珠菌臨床株;泳道5:陰性對(duì)照;泳道6:都柏林念床株;泳道8:DNAmar一、er(100，200，300聲00，500，600bp)。行8%聚丙烯酞胺凝膠垂直電泳(如圖3)，條帶示2種帶型，一30Obp之間有種帶型示3條條帶，在100一Zobo1條條帶。另1種帶型示2條條帶條帶，300~400Pb有1條條帶。39例臨床株酶切產(chǎn)物示前一種帶型。都柏林念珠產(chǎn)物示后一種帶型。

碩士研究生學(xué)位論文12345678圖3.標(biāo)準(zhǔn)株;泳道3:念珠菌標(biāo)準(zhǔn)株;酶切產(chǎn)物8%聚丙烯酚胺凝膠垂直電泳圖。泳道1:陰性對(duì)照;泳道:2都柏林念珠菌都柏林念珠菌臨床株:泳道4:DNA泳道6、7:白念珠菌臨床株;泳道8:marker(100，200，300，40。，500，600bp):泳道5:白DNAmarker(100，200，300


本文編號(hào)：3262550