目的:檢測視蛋白（opsins,OPNs）是否在人皮膚成纖維細(xì)胞中表達(dá),進(jìn)一步探索OPNs是否參與調(diào)控紫外線A（UVA）誘導(dǎo)的光老化形成,并明確其分子調(diào)控機(jī)制。方法:貼壁法分離培養(yǎng)人原代皮膚成纖維細(xì)胞,傳至第3代,利用形態(tài)學(xué)觀察、特異性波形蛋白熒光染色鑒定后進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。免疫熒光檢測OPNs在成纖維細(xì)胞中的表達(dá)及定位;實(shí)時(shí)熒光定量PCR（Real-time PCR,RT-PCR）檢測OPNs的核酸水平;蛋白質(zhì)印跡法（Western-blot）在蛋白水平上驗(yàn)證OPNs的表達(dá)。不同劑量UVA照射人皮膚成纖維細(xì)胞后,形態(tài)學(xué)觀察細(xì)胞狀態(tài),并利用CCK8檢測細(xì)胞存活率,Western-blot檢測照射后OPNs的表達(dá)變化;根據(jù)CCK8及OPNs表達(dá)變化的結(jié)果,以10J/cm² UVA反復(fù)照射人皮膚成纖維細(xì)胞,構(gòu)建成纖維細(xì)胞光老化模型;通過形態(tài)學(xué)、細(xì)胞周期及β半乳糖苷酶染色確定光老化模型建立成功。利用Western-blot檢測OPN3、基質(zhì)金屬蛋白酶-1（Matrix metalloproteinase-1,MMP1）及基質(zhì)金屬蛋白酶-3（Matrix metallopro... 

【文章來源】：貴州醫(yī)科大學(xué)貴州省

【文章頁數(shù)】：55 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

至3代成纖維細(xì)胞(倒置顯微鏡×100)

后細(xì)胞形態(tài)較清楚，胞體細(xì)長呈長梭形，核卵圓形居中，細(xì)胞呈柵欄狀及生長(圖 1c)。免疫熒光染色顯示：培養(yǎng)的細(xì)胞核呈藍(lán)色，卵圓形，胞質(zhì)熒光，Vimentin 表達(dá)陽性（圖 2）。圖 1 1 至 3 代成纖維細(xì)胞(倒置顯微鏡×100)Fig.1 1 to 3 generation fibroblasts（Inverted microscope×100）

貴州醫(yī)科大學(xué) 2019 屆科學(xué)學(xué)位碩士研究生學(xué)位論文N3 在人皮膚成纖維細(xì)胞中的高表達(dá)驗(yàn)證 OPNs 在人皮膚成纖維細(xì)胞中的表達(dá)，首先使用免疫熒光法檢白表達(dá)及定位。結(jié)果顯示：視蛋白呈半圓形或圓形位于成纖維細(xì)胞。RT-PCR 和 Western blot 分別在 mRNA 和蛋白水平證實(shí)了視蛋白 OPN3 在蛋白及基因水平表達(dá)顯著高于其他視蛋白表達(dá)水平（P＜0，可能 OPN3 在成纖維細(xì)胞中發(fā)揮重要的作用。


本文編號：3238994