本文關(guān)鍵詞：β-catenin對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞A375的增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：背景： 惡性黑色素瘤是一種較常見的惡性腫瘤，好發(fā)于皮膚部，惡性程度高，平均生存期約30.3個(gè)月，且發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì)。目前，治療惡性黑色素瘤主要的手段有手術(shù)及抗腫瘤治療（化療、放療、生物治療），但其療效均較差。于是尋求一種新的有效治療措施有著重要意義。近年來，發(fā)現(xiàn)Wnt/β-catenin信號(hào)通路與多種惡性腫瘤發(fā)生發(fā)展均有密切聯(lián)系，但其作用機(jī)制沒有被完全認(rèn)知�，F(xiàn)已認(rèn)為，Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的核心蛋白β-catenin在細(xì)胞漿內(nèi)異常聚積是Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路激活的標(biāo)志。本實(shí)驗(yàn)利用含有β-catenin特異序列RNA干擾慢病毒沉默β-catenin蛋白的表達(dá)，以此阻斷Wnt/β-catenin信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路，觀察β-catenin沉默對(duì)惡性黑色素瘤A375細(xì)胞增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響。 目的： 探討通過沉默Wnt/β-catenin信號(hào)通路中的關(guān)鍵蛋白β-catenin，觀察β-catenin對(duì)人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞增殖、侵襲、遷移以及凋亡的影響，從而為惡性黑色素瘤的治療提供依據(jù)。 方法： 1.制作干擾慢病毒液：β-catenin-RNAi-LV(β-catenin干擾慢病毒液)和β-catenin-negative-LV (空載體慢病毒液)。分別感染人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞，得到的穩(wěn)定感染細(xì)胞株分別標(biāo)記為A375-RNAi、A375-negative。采用Western Blot法檢測(cè)感染后的A375-RNAi、A375-negative細(xì)胞中β-catenin蛋白表達(dá)水平，并以未感染的細(xì)胞作對(duì)照。 2. MTT法分別檢測(cè)A375-RNAi、A375-negative細(xì)胞增殖能力，并以未感染的細(xì)胞作對(duì)照。 3.采用細(xì)胞平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè)A375-RNAi、A375-negative細(xì)胞平板克隆形成能力，并以未感染的細(xì)胞作對(duì)照。 4.采用Transwell法檢測(cè)A375-RNAi、A375-negative細(xì)胞體外趨化侵襲、遷移能力，并以未感染的細(xì)胞作對(duì)照。 5.流式細(xì)胞術(shù)亞G1峰法檢測(cè)A375-RNAi、A375-negative細(xì)胞的凋亡率，并以未感染的細(xì)胞作對(duì)照。 結(jié)果： 1. Western Blot結(jié)果顯示：β-catenin在人惡性黑色素瘤A375細(xì)胞中高表達(dá)，β-catenin在A375-RNAi細(xì)胞中的表達(dá)量下降，A375-RNAi細(xì)胞β-catenin蛋白的表達(dá)量較未感染的A375細(xì)胞下降約55.1%（P0.05），證實(shí)β-catenin被β-catenin-RNAi-LV有效沉默；A375-negative細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白表達(dá)量與A375細(xì)胞無明顯差異（P0.05）。 2. MTT結(jié)果顯示：A375-RNAi細(xì)胞與A375-negative細(xì)胞、A375細(xì)胞相比增殖活性均降低(P＜0.05)；A375-negative細(xì)胞較A375細(xì)胞增殖活性無明顯差異（P＞0.05）。 3.細(xì)胞平板克隆實(shí)驗(yàn)檢測(cè)結(jié)果：A375-RNAi細(xì)胞與A375-negative細(xì)胞、A375細(xì)胞平板克隆形成能力相比均減低(P＜0.05)；A375-negative細(xì)胞較A375細(xì)胞平板克隆形成能力無明顯差異（P＞0.05）。 4. Transwell結(jié)果顯示：A375-RNAi細(xì)胞與A375-negative細(xì)胞、A375細(xì)胞侵襲、遷移能力相比均顯著下降(P＜0.05)，A375-negative細(xì)胞較A375細(xì)胞的侵襲、遷移能力無明顯差異（P＞0.05）。 5.流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示：A375-RNAi細(xì)胞與A375-negative細(xì)胞、A375細(xì)胞相比凋亡率明顯增高(P＜0.05)；A375-negative細(xì)胞較A375細(xì)胞凋亡率無顯著差異性(P＞0.05)。 結(jié)論： 1.慢病毒載體介導(dǎo)siRNA能有效沉默人黑色素細(xì)胞瘤A375細(xì)胞內(nèi)β-catenin蛋白的表達(dá)。 2.下調(diào)β-catenin表達(dá)能使人黑色素細(xì)胞瘤A375細(xì)胞增殖變緩，細(xì)胞克隆形成能力減弱，細(xì)胞侵襲、遷移能力下降，細(xì)胞凋亡率增加。β-catenin有望成為治療人惡性黑色素瘤有效靶點(diǎn)。
【關(guān)鍵詞】：惡性黑色素瘤 β-catenin siRNA 增殖 侵襲 遷移 凋亡
【學(xué)位授予單位】：南昌大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.5
【目錄】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 中英文縮略詞表10-11
• 第1章 引言11-14
• 第2章 材料與方法14-27
• 2.1 材料14-19
• 2.1.1 主要試劑14-15
• 2.1.2 儀器設(shè)備及耗材15-16
• 2.1.3 實(shí)驗(yàn)對(duì)象16
• 2.1.4 慢病毒 RNAi 包裝16
• 2.1.5 主要試劑的配置16-19
• 2.2 實(shí)驗(yàn)方法19-26
• 2.2.1 實(shí)驗(yàn)分組19
• 2.2.2 細(xì)胞培養(yǎng)19-21
• 2.2.3 慢病毒載體 siRNA 感染 A375 細(xì)胞21-22
• 2.2.4 Western Blot22-24
• 2.2.5 MTT 法檢測(cè) A375、A375-negative、A375-RNAi 細(xì)胞的增殖情況24
• 2.2.6 平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測(cè) A375 、 A375-negative 、A375-RNAi 細(xì)胞的克隆形成能力24-25
• 2.2.7 Transwell 法檢測(cè) A375、A375-negative、A375-RNAi 細(xì)胞的侵襲及遷移情況25-26
• 2.2.8 流式細(xì)胞學(xué) Sub-G1峰法檢測(cè)細(xì)胞凋亡26
• 2.3 統(tǒng)計(jì)方法26-27
• 第3章 結(jié)果27-34
• 3.1 倒置熒光顯微鏡下觀察各組 A375 細(xì)胞形態(tài)27-28
• 3.2 Western Blot 檢測(cè)β-catenin 表達(dá)28
• 3.3 MTT 法檢測(cè)慢病毒載體介導(dǎo) siRNA 對(duì) A375 細(xì)胞增殖作用28-29
• 3.4 平板細(xì)胞克隆形成實(shí)驗(yàn)29-30
• 3.5 Transwell 法檢測(cè)細(xì)胞侵襲及遷移能力30-32
• 3.5.1 Transwell 法檢測(cè)細(xì)胞侵襲能力30-31
• 3.5.2 Transwell 法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力31-32
• 3.6 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)慢病毒載體介導(dǎo) siRNA 對(duì) A375 細(xì)胞凋亡影響32-34
• 第4章 討論34-40
• 4.1 細(xì)胞增殖36-37
• 4.2 細(xì)胞侵襲與遷移37-38
• 4.3 細(xì)胞凋亡38-40
• 第5章 結(jié)論40-41
• 致謝41-42
• 參考文獻(xiàn)42-45
• 攻讀學(xué)位期間的研究成果45-46
• 綜述46-53
• 參考文獻(xiàn)51-53

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

1 陳瑾;DKK1在黑素瘤中的表達(dá)及其對(duì)黑素瘤發(fā)生發(fā)展的調(diào)控的實(shí)驗(yàn)研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2011年

  本文關(guān)鍵詞：β-catenin對(duì)惡性黑色素瘤細(xì)胞A375的增殖、侵襲、遷移及凋亡的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號(hào)：321655