研究表明，人體內(nèi)天然存在的抗角蛋白自身抗體（anti-keratin auto antibody,AK auto Ab）是維持機(jī)體免疫狀態(tài)平衡的重要成員。一些病理情況下（如銀屑病、接觸性皮炎等），AK auto Ab的存在有利于限制病情的進(jìn)展，促進(jìn)損傷的修復(fù)，對機(jī)體具有有益的保護(hù)作用。動物實(shí)驗(yàn)和體外研究都提示當(dāng)機(jī)體內(nèi)AK auto Ab水平低下時，人為補(bǔ)充抗角蛋白抗體有可能成為該類疾病新的治療措施。 目的： 目的基因的高效表達(dá)是制備有應(yīng)用價值的治療性抗體的重要前提。抗體除用于基礎(chǔ)研究外，還可以在臨床診斷和治療中應(yīng)用，特別是具有低免疫原性、可以快速到達(dá)作用靶點(diǎn)和可迅速清除等優(yōu)點(diǎn)的小分子抗體。我們利用噬菌體抗體庫技術(shù)篩選獲得了高親和力、高特異性人源性抗角蛋白抗體。為了提高其產(chǎn)量，我們用大腸桿菌包涵體表達(dá)然后體外變性、復(fù)性的方法及巴氏畢赤酵母表達(dá)等不同方法表達(dá)小分子抗角蛋白抗體，以得到高表達(dá)的抗角蛋白抗體并為其下一步應(yīng)用研究打下基礎(chǔ)。 方法：實(shí)驗(yàn)內(nèi)容共分為3個部分，操作方法簡述如下： 1．抗角蛋白Fab抗體在大腸桿菌中的包涵體表達(dá)與復(fù)性 以已構(gòu)建好的質(zhì)粒p3MH／F... 

【文章來源】：中國人民解放軍空軍軍醫(yī)大學(xué)陜西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：95 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
縮略語表
中文摘要
英文摘要
前言
文獻(xiàn)回顧
    1 角蛋白及天然抗角蛋白自身抗體
    2 基因工程抗體及其表達(dá)策略
實(shí)驗(yàn)內(nèi)容
    1 抗角蛋白Fab抗體在大腸桿菌中的包涵體表達(dá)與復(fù)性研究
        1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        1.2 方法與步驟
        1.3 結(jié)果
        1.4 討論
    2 人源性抗角蛋白單鏈抗體在巴氏畢赤酵母的分泌表達(dá)
        2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2 方法與步驟
        2.3 結(jié)果
        2.4 討論
    3 人源性抗角蛋白抗體Fab段在巴氏畢赤酵母的分泌表達(dá)
        3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2 方法與步驟
        3.3 結(jié)果
        3.4 討論
小結(jié)
參考文獻(xiàn)
個人簡歷
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]抗角蛋白單克隆抗體5G5對培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞增殖的影響[J]. 張亮,趙小東,劉玉峰,劉彥仿,蘭風(fēng)華.  中華皮膚科雜志. 2001(04)
[3]包含體蛋白質(zhì)的復(fù)性研究進(jìn)展[J]. 寧云山,李妍,王小寧.  生物技術(shù)通訊. 2001(03)
[4]重組包涵體蛋白質(zhì)的折疊復(fù)性[J]. 馮小黎.  生物化學(xué)與生物物理進(jìn)展. 2001(04)
[5]天然抗角蛋白自身抗體抑制角質(zhì)形成細(xì)胞及鱗狀細(xì)胞癌細(xì)胞增殖的作用[J]. 王文清,劉玉峰,趙小東,馬翠玲.  中華皮膚科雜志. 2001(03)
[6]天然抗角蛋白自身抗體對體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞細(xì)胞周期的影響(英文)[J]. 李承新,萬業(yè)宏,劉玉峰,孫林潮.  第四軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2001(05)
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[8]抗角蛋白自身抗體研究現(xiàn)狀與展望[J]. 王剛,劉玉峰.  中國皮膚性病學(xué)雜志. 2000(01)
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[10]酵母表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)外源基因的研究進(jìn)展[J]. 鄭敏,張飛雄,劉麗.  首都師范大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版). 1999(04)



本文編號：3187835