目的：微囊藻毒素MC-LR是藍藻分泌的一種七環(huán)肽次級代謝產物,越來越多的證據表明,微囊藻毒素-LR可以促進人類腫瘤發(fā)生。而我們之前的研究已經證明微囊藻毒素-LR可以促進黑色素瘤細胞系MDA-MB-435的侵襲,但是進一步的分子機制并不是十分清楚。本研究旨在通過體外和體內實驗證明微囊藻毒素-LR促進黑色素瘤細胞侵襲的分子機制。方法：1、Western blot方法檢測不同濃度的微囊藻毒素-LR（0,5,12.5,25,50nM）處理黑色素瘤細胞系MDA-MB-435,pAKT/AKT蛋白表達變化以及負向調節(jié)PI3-K/AKT信號通路的PTEN蛋白表達情況。2、進一步通過添加PI3-K/AKT抑制劑LY294002,熒光素酶報告基因方法檢測LY294002是否逆轉了MMP-2/-9的啟動子活性；Western blot方法在蛋白水平檢測微囊藻毒素-LR促進的MMP-2/-9的過表達是否被逆轉；通過transwell方法檢測微囊藻毒素-LR促進的腫瘤侵襲是否被逆轉。3、用siRNA干擾AKT表達,通過transwell實驗檢測微囊藻毒素-LR促進的腫瘤侵襲是否被逆轉。4、在裸鼠水平上通過皮下... 

【文章來源】：南京醫(yī)科大學江蘇省

【文章頁數】：69 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

微囊藻毒素-LR對于MDA-MB-435異種移植裸鼠體重的影響

微囊藻毒素-LR對于MDA-MB-435腫瘤體積和重量的影響

學方法來檢測MMP-2/-9的mRNA水平和蛋白水平的變化。實時定量PCR結果(圖5.1)表明：通過微囊藻毒素-LR灌胃處理組的裸鼠腫瘤內MMP-2/-9的mRNA水平相對于對照組都增高了（p<0.05)。免疫組織化學結果同樣是微囊藻毒素-LR處理組腫瘤內MMP-2/-9的蛋白表達水平相對于對照組增加了(圖5.2)(圖5.3)(p<0.05)o這個結果趨勢與實時定量PCR的結果一致。只是MMP-2/-9蛋白表達量在低濃度和中濃度微囊藻毒素-LR處理組表現出劑量依賴性，然而高濃度微囊藻毒素-LR劑量組MMP-2/-9蛋白表達量反而下降了。AKT的激活對于PI3-K/AKT通路在腫瘤侵襲轉移中所起作用是很重要的，因此我們進一步用石蠟切片通過免疫組織化學方法檢測pAKT的表達情況(圖5.4)。結果表明：與對照組相比，微囊藻毒素-LR處理組的pAKT的蛋白表達量顯著上調了（p<().05),這與我們體外實驗結果是一致的。2.5 ■MMP2| ，□ MMP9 ；■0 * **I: m nil 110 0.001 0.01 0.1圖5.1微囊藻毒素-LR在MDA-MB-435腫瘤內促進MMP-2/-9 mRNA水平表達取不同處理組(control組、低濃度組(O.OOlmg/kg/d)、中濃度組(0.01 mg/kg/d)和高濃度組（0.1 mg/kg/d))腫瘤組織勾裝破碎后提取RNA，逆轉錄為cDNA后，通過實時定量PCR實驗檢測各組織中MMP-2/-9的mRNA水平變化，以GAPDH為內參。實驗結果通過單因素方差分析方法（ANOVA)檢驗（*表示與對照組相比P < 0.05

【參考文獻】：
期刊論文
[1]微囊藻毒素促肝癌過程中肝細胞bcl-2及bax基因表達研究[J]. 胡志堅,陳華,孫昌盛,李一偉,高凌云.  中華預防醫(yī)學雜志. 2002(04)
[2]Relationship Between Microcystin in Drinking Water and Colorectal Cancer[J]. ZHOU LUN*2, YU HAI+ AND CHEN KUN§ *Cancer Institute, Zhejiang University,;+School of Medicine, Zhejiang University; §School of Public Health, Zhejiang University, Hangzhou 310009, China.  Biomedical and Environmental Sciences. 2002(02)



本文編號：3144181