本文關(guān)鍵詞：非黑素瘤性皮膚腫瘤中Beta-人乳頭瘤病毒感染分析及機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：非黑素瘤性皮膚腫瘤（nonmelanoma skin cancer，NMSC）包括鱗狀細胞癌（squamous cell carcinoma，SCC）、基底細胞癌（basal cell carcinoma，BCC）、光線性角化�。╝ctinic keratosis，AK）、角化棘皮瘤等，是最常見的皮膚腫瘤，其中SCC是我國最常見的NMSC。隨著生活方式和生活環(huán)境的改變，NMSC的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，由此產(chǎn)生的大量社會負擔(dān)和醫(yī)療負擔(dān)不容忽視。NMSC的發(fā)病與年齡、膚色、人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染、紫外線損傷、長期使用免疫抑制劑（如器官移植受者、艾滋病患者）等多種因素相關(guān)。其中HPV感染、紫外線損傷是其發(fā)病的主要危險因素。HPV是一類小的雙鏈閉環(huán)DNA病毒，與許多疾病的發(fā)生相關(guān)，迄今已發(fā)現(xiàn)約130種HPV亞型，并將其歸為16個種屬（如α、β、γ、u-HPV等）。目前已經(jīng)明確α-HPV可導(dǎo)致宮頸癌發(fā)生，而β-HPV與NMSC密切相關(guān)。然而，盡管β-HPV是NMSC發(fā)生重要危險因素，是否也存在致病的高危亞型，其致病機理如何，目前仍不清楚。 與α-HPV不同，β-HPV的致病機制研究剛剛起步，目前多認為β-HPV與紫外線聯(lián)合導(dǎo)致NMSC的發(fā)生。腫瘤的發(fā)生與多種因素相關(guān)，病毒感染是腫瘤發(fā)生的重要生物因素，然而病毒感染導(dǎo)致腫瘤發(fā)生的機制尚不清楚。細胞自噬是Ⅱ型程序性死亡，廣泛存在于真核細胞。正常情況下，自噬發(fā)揮著“清道夫”的作用，吞噬、降解受損的細胞器和病原微生物，是一種重要的防御和保護機制。細胞自噬異常與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展密切相關(guān)，在腫瘤進展的不同階段，細胞自噬發(fā)揮的效應(yīng)也不同。在腫瘤早期，細胞自噬可能發(fā)揮著抑癌的作用，在腫瘤后期則可能會促進癌癥的發(fā)生。如何積極利用細胞自噬抑制癌細胞增殖的功能，最大程度遏制其促癌效應(yīng)是未來研究的重中之重。 本研究檢測192例NMSC及80例正常對照新鮮組織中β-HPV DNA，旨在了解我國西北地區(qū)NMSC中β-HPV感染情況，并通過進一步對陽性標本進行β-HPV分型以明確可能致病的高危亞型；通過免疫組化檢測NMSC中自噬水平變化及相關(guān)信號通路改變，初步探討β-HPV感染引起的細胞自噬在NMSC中的致病機理。 實驗?zāi)康模?1.了解我國西北地區(qū)NMSC中β-HPV流行現(xiàn)狀。 2.明確在NMSC中具有關(guān)鍵致癌作用的β-HPV亞型。 3.初步探討細胞自噬在β-HPV感染與NMSC發(fā)病中的作用。 實驗方法： 首先，我們收集經(jīng)病理確診的192例NMSC及80例正常對照新鮮組織，通過巢式PCR檢測NMSC中β-HPV DNA，PCR檢測α-HPV DNA，并采用巢式PCR的方法比較石蠟組織中β-HPV感染率；其次，我們應(yīng)用特異型PCR引物對篩選出的陽性標本進行β-HPV分型；經(jīng)統(tǒng)計分析得出可能具有關(guān)鍵致癌作用的β-HPV亞型，利用免疫組織化學(xué)技術(shù)觀察HPV感染后AK與SCC自噬水平及相關(guān)信號通路的改變；最后，采用透射電鏡觀察NMSC中自噬水平的變化。 實驗結(jié)果： 1.分析我國西北地區(qū)NMSC中β-HPV流行現(xiàn)狀：采用巢式PCR檢測NMSC新鮮組織中β-HVP DNA結(jié)果表明，50例AK、20例SCC、50例BCC、72例脂溢性角化�。╯eborrheic keratosis，SK）、80例正常對照中β-HPV陽性率分別為80%、75%、44%、21%和35%。經(jīng)統(tǒng)計分析，AK和SCC中β-HPV陽性率遠高于對照組，P0.05，ORAK=8.75，ORSCC=5.469。而SK、BCC檢出率較對照相比，差異無統(tǒng)計學(xué)意義。不同來源正常皮膚中，來自AK、SCC對照中β-HPV陽性率較健康對照組織明顯增高，結(jié)果有統(tǒng)計學(xué)意義。AK、SCC、BCC、SK與自身對照β-HPV檢測結(jié)果顯示，AK、SCC周圍正常皮膚中β-HPV陽性率顯著高于其他病例組。 2. NMSC中α-HPV感染分析：α-HPV DNA檢測結(jié)果顯示，無論是AK、SCC、SK、BCC還是正常對照，α-HPV陽性率均較低，差異無統(tǒng)計學(xué)意義；α-HPV與β-HPV混合感染AK1例、SCC1例、對照組2例。SK與BCC無混合感染。 3.石蠟組織中β-HPV感染分析：同樣采用巢式PCR法檢測AK和SCC石蠟組織中β-HPV DNA，陽性率AK62.5%（15/24），SCC44%（11/25），正常對照8.3%（1/12），AK和SCC中β-HPV檢出率較對照明顯增高，但是與新鮮組織相比β-HPV陽性率均較低。 4. β-HPV特異性分型：利用12種β-HPV（HPV5、8、15、17、19、20、21、23、36、38、49、80）特異性PCR引物對陽性標本進一步分型，結(jié)果顯示：在AK和SCC中，HPV38檢出率最高，其中，15例SCC中β-HPV38陽性者為12例（80%），40例AK中陽性者25例（62.5%）。而在SK及正常皮膚中以上12種HPV檢出率均較低。 5.免疫組化分析NMSC中自噬變化：免疫組化結(jié)果顯示，與正常對照（HPV+/HPV-）相比，HPV感染后各病例組（HPV38+/HPV38-）LC3、Beclin1表達均增高，特別是在HPV38+SCC組陽性著色細胞最多，顏色最深（P0.001），自噬水平明顯升高；p62在正常皮膚中呈弱陽性表達，在SCC中無明顯陽性著色（P0.05）。 6.免疫組化分析NMSC中PKR信號通路：與對照組相比，HPV感染后（HPV38+/HPV38-），各病例組PKR、p-PKR、eIf2α、p-eIf2α表達均增高（P0.05），尤其HPV38+AK組p-PKR、p-eIf2α表達明顯高，而SCC較對照組無顯著差異。 7.透射電鏡（transmission electron microscope，TEM）觀察NMSC自噬超微結(jié)構(gòu)：HPV38+SCC組織中自噬小體數(shù)目明顯多于AK和正常對照組（P0.001），，該結(jié)果與免疫組化一致。 主要結(jié)論： 1.β-HPV在AK和SCC中檢出率遠高于對照組，提示β-HPV與AK、SCC的發(fā)生，發(fā)展密切相關(guān)。 2.HPV38是與AK、SCC發(fā)生密切相關(guān)的主要亞型。 3.AK、SCC中細胞自噬水平升高，提示：一方面，在SCC發(fā)生早期階段（即癌前病變AK），自噬水平增高可清除受損的細胞器維持基因組穩(wěn)定性發(fā)揮抑癌作用；另一方面，在SCC進展期，過度誘導(dǎo)自噬可為細胞轉(zhuǎn)化提供營養(yǎng)和能量，促進癌細胞在惡劣環(huán)境下生存、增殖。 4. HPV38可能通過激活PKR-eIf2α信號通路誘導(dǎo)自噬水平增高。
【關(guān)鍵詞】：β-人乳頭瘤病毒 非黑素瘤性皮膚癌 鱗狀細胞癌 光線性角化病 蛋白激酶R 自噬
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2013
【分類號】：R739.5
【目錄】：

• 縮略語表5-7
• 中文摘要7-11
• Abstract11-15
• 前言15-16
• 文獻回顧16-29
• 1 Β-HPV 在皮膚良惡性增生性病變中的作用17-23
• 1.1 HPV 分類17-18
• 1.2 HPV 致癌機理18-20
• 1.3 HPV 的檢測技術(shù)20-21
• 1.4 β-HPV、紫外線與 NMSC21-23
• 2 細胞自噬研究進展23-29
• 2.1 細胞自噬23-25
• 2.2 細胞自噬作用及分子機制25-26
• 2.3 細胞自噬與病毒感染26-28
• 2.4 細胞自噬與腫瘤28-29
• 1 實驗材料與儀器29-32
• 1.1 標本來源29-30
• 1.2 主要試劑與儀器30-32
• 2 實驗方法32-36
• 2.1 PCR 檢測β-HPV 及α-HPV DNA32-35
• 2.2 β-HPV 特異性分型35
• 2.3 免疫組化35-36
• 2.4 透射電鏡36
• 2.5 統(tǒng)計方法36
• 3 實驗結(jié)果36-43
• 3.1 NMSC 中 HPV 感染分析36-39
• 3.2 HPV38 感染組織中自噬水平檢測39-43
• 4 討論43-47
• 4.1 β-HPV 在 NMSC 發(fā)病中的作用43-45
• 4.2 HPV38 增加細胞自噬在 NMSC 發(fā)病中的作用45-47
• 小結(jié)47-48
• 參考文獻48-57
• 附錄57-59
• 個人簡歷和研究成果59-60
• 致謝60

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 張璐;林軍;鄭玉果;朱寶泉;;病毒與腫瘤發(fā)生及治療的關(guān)系[J];世界臨床藥物;2012年06期

2 艾勇;常見非黑素瘤性皮膚癌的外科治療進展[J];中國美容醫(yī)學(xué);2004年01期

  本文關(guān)鍵詞：非黑素瘤性皮膚腫瘤中Beta-人乳頭瘤病毒感染分析及機制探討，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：302418