甲真菌病甲組織DNA提取方法及AP-PCR快速診斷的初步研究
發(fā)布時(shí)間:2021-01-28 14:28
甲真菌�。╫nychomycosis),舊稱甲癬(tinea unguium)是由致病性真菌感染指、趾甲引起的一種慢性、感染性、傳染性皮膚病,是皮膚科常見(jiàn)病、多發(fā)病,又是頑固、易復(fù)發(fā)的難治病。占淺部真菌感染的30%及所有甲病的50%。在普通人群中的發(fā)病率為2%15%,目前主要依靠臨床特征、直接鏡檢和真菌培養(yǎng)診斷。但KOH法直接鏡檢陽(yáng)性率僅為50%75%,且易受標(biāo)本數(shù)量和質(zhì)量、檢驗(yàn)者的經(jīng)驗(yàn)技術(shù)等因素的影響;真菌培養(yǎng)約有30%的假陰性,陽(yáng)性率波動(dòng)于25%80%之間,且需要4周方可確定菌種,鏡檢和培養(yǎng)相結(jié)合的正確診斷率約為50%75%,上述問(wèn)題限制了甲真菌病的快速診斷和治療。隨著新一代內(nèi)用抗真菌藥物廣泛應(yīng)用于臨床,這些藥物各有特定的抗菌譜,且較昂貴和有明顯的副作用,但傳統(tǒng)的真菌病診斷方法不能解決快速選藥的問(wèn)題,因此有必要建立一種快速高效且敏感的確診甲真菌病的方法,以利指導(dǎo)臨床用藥。近年來(lái)分子生物學(xué)技術(shù)已滲透至科學(xué)研究的各個(gè)領(lǐng)域,如隨機(jī)引物PCR(AP-PCR),mtRNA的限制性酶切分析(RFLP),探針...
【文章來(lái)源】:大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】:48 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
玻璃珠法菌株DNA結(jié)果
瓊脂糖凝膠電泳圖 1 玻璃珠法菌株 DNA 結(jié)果泳道為 Marker,2-6 泳道為紅色毛癬菌 DNA,7-9 泳道為白念珠菌珠法從菌株組織中可獲得目的 DNA,紅色毛癬菌與白均約為 19-20kb。每 100mg 組織可獲得約 30ug DNA,但斷裂。
圖 3 微量提取法菌株 DNA 結(jié)果道為 Marker,2-6 泳道為紅色毛癬菌 DNA,7-9 泳道為白念珠菌 DNCTAB 微量提取法從菌株組織中可獲得目的 DNA,紅色毛癬珠菌的分子量均約為 19-20kb。每 100mg 組織可獲得約 50ug 鏈無(wú)明顯斷裂,且 DNA 純度較好。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]2002—2003年中國(guó)部分地區(qū)甲真菌病致病菌流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告[J]. 吳紹熙,劉維達(dá),郭寧如,廖萬(wàn)清,李若瑜,王家俊,章強(qiáng)強(qiáng),席麗艷,冉玉平,賴維,鄭岳臣. 臨床皮膚科雜志. 2005(09)
[2]杭州地區(qū)973例甲真菌病分析[J]. 夏修蛟,鄭俊惠,金海生,周謂珩,許愛(ài)娥. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志. 2005(03)
[3]甲真菌病治療指南[J]. Roberts DT,Taylor WD,Boyle J,符美華,李筱芳,劉維達(dá). 國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè). 2004(05)
[4]紅色毛癬菌的基因分型研究[J]. 李喬,楊國(guó)玲,劉維達(dá),李朝軍. 中華皮膚科雜志. 2002(05)
[5]致病性真菌DNA提取方法的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 陳官芝,徐秀蓮,吳延芳,王云,羅兵. 中華皮膚科雜志. 2002(05)
[6]A prospective epidemiological study on tinea pedis and onychomycosis in Hong Kong[J]. 鄭秀儀,莊禮賢. Chinese Medical Journal. 2002(06)
[7]用任意引物聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行皮膚癬菌的子生物學(xué)研究[J]. 孔祥明,楊國(guó)玲,金禮吉,安利佳,李喬,林熙然. 中華皮膚科雜志. 2001(05)
[8]武漢地區(qū)3301例皮膚真菌病致病菌種分析[J]. 江萍,夏清,張長(zhǎng)生,曾志良,孫曾拯. 中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2001(04)
[9]371例甲真菌病致病真菌菌種分析[J]. 陳玲娣,吳瑞勤,朱慧琴,黨宏,朱光斗. 華中醫(yī)學(xué)雜志. 2001(02)
[10]廣州地區(qū)甲真菌病病原菌流行病學(xué)的多中心研究[J]. 賴維,曾凡欽,盧念祖,曾仁山,侯顯增,楊健,劉次偉,佟菊貞,徐廣坤. 中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2001(02)
本文編號(hào):3005155
【文章來(lái)源】:大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省
【文章頁(yè)數(shù)】:48 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【部分圖文】:
玻璃珠法菌株DNA結(jié)果
瓊脂糖凝膠電泳圖 1 玻璃珠法菌株 DNA 結(jié)果泳道為 Marker,2-6 泳道為紅色毛癬菌 DNA,7-9 泳道為白念珠菌珠法從菌株組織中可獲得目的 DNA,紅色毛癬菌與白均約為 19-20kb。每 100mg 組織可獲得約 30ug DNA,但斷裂。
圖 3 微量提取法菌株 DNA 結(jié)果道為 Marker,2-6 泳道為紅色毛癬菌 DNA,7-9 泳道為白念珠菌 DNCTAB 微量提取法從菌株組織中可獲得目的 DNA,紅色毛癬珠菌的分子量均約為 19-20kb。每 100mg 組織可獲得約 50ug 鏈無(wú)明顯斷裂,且 DNA 純度較好。
【參考文獻(xiàn)】:
期刊論文
[1]2002—2003年中國(guó)部分地區(qū)甲真菌病致病菌流行病學(xué)調(diào)查報(bào)告[J]. 吳紹熙,劉維達(dá),郭寧如,廖萬(wàn)清,李若瑜,王家俊,章強(qiáng)強(qiáng),席麗艷,冉玉平,賴維,鄭岳臣. 臨床皮膚科雜志. 2005(09)
[2]杭州地區(qū)973例甲真菌病分析[J]. 夏修蛟,鄭俊惠,金海生,周謂珩,許愛(ài)娥. 中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合皮膚性病學(xué)雜志. 2005(03)
[3]甲真菌病治療指南[J]. Roberts DT,Taylor WD,Boyle J,符美華,李筱芳,劉維達(dá). 國(guó)外醫(yī)學(xué).皮膚性病學(xué)分冊(cè). 2004(05)
[4]紅色毛癬菌的基因分型研究[J]. 李喬,楊國(guó)玲,劉維達(dá),李朝軍. 中華皮膚科雜志. 2002(05)
[5]致病性真菌DNA提取方法的實(shí)驗(yàn)研究[J]. 陳官芝,徐秀蓮,吳延芳,王云,羅兵. 中華皮膚科雜志. 2002(05)
[6]A prospective epidemiological study on tinea pedis and onychomycosis in Hong Kong[J]. 鄭秀儀,莊禮賢. Chinese Medical Journal. 2002(06)
[7]用任意引物聚合酶鏈反應(yīng)進(jìn)行皮膚癬菌的子生物學(xué)研究[J]. 孔祥明,楊國(guó)玲,金禮吉,安利佳,李喬,林熙然. 中華皮膚科雜志. 2001(05)
[8]武漢地區(qū)3301例皮膚真菌病致病菌種分析[J]. 江萍,夏清,張長(zhǎng)生,曾志良,孫曾拯. 中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2001(04)
[9]371例甲真菌病致病真菌菌種分析[J]. 陳玲娣,吳瑞勤,朱慧琴,黨宏,朱光斗. 華中醫(yī)學(xué)雜志. 2001(02)
[10]廣州地區(qū)甲真菌病病原菌流行病學(xué)的多中心研究[J]. 賴維,曾凡欽,盧念祖,曾仁山,侯顯增,楊健,劉次偉,佟菊貞,徐廣坤. 中國(guó)皮膚性病學(xué)雜志. 2001(02)
本文編號(hào):3005155
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