最近的研究表明角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡在濕疹性皮炎慢性化中起著關(guān)鍵的作用。角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡導(dǎo)致細(xì)胞間連接的破壞,真皮內(nèi)水分滲入表皮內(nèi),在表皮內(nèi)形成海綿樣病變,這可以使皮膚的屏障功能受到損害,從而加重濕疹性皮炎。因此,角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡為濕疹性皮炎慢性化的轉(zhuǎn)折點(diǎn),阻斷角質(zhì)形成細(xì)胞的凋亡可以減輕濕疹慢性化進(jìn)程的發(fā)生,從而為濕疹性皮炎的治療提供了一條新的途徑,成為藥物篩選的一個(gè)新靶點(diǎn)。流式細(xì)胞儀可以定量檢測細(xì)胞的凋亡,此方法雖然敏感準(zhǔn)確,但是需要一定量的細(xì)胞和大量的試劑,并且操作復(fù)雜、耗時(shí),不適合用于高通量的藥物篩選。Sulphorhodamine B（SRB）和Microtetrazolium （MTT）方法是檢測細(xì)胞增殖情況的快速、簡便的96孔板檢測方法,如果能區(qū)分出細(xì)胞的增殖抑制是由凋亡而不是壞死引起的,就可用此方法初步篩選抑制細(xì)胞凋亡的藥物。本實(shí)驗(yàn)中用干擾素-γ（IFN-γ）和抗Fas單克隆抗體（antiFas Ab）共同作用誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞HaCaT凋亡,部分模擬濕疹性皮炎的發(fā)病機(jī)制,以用于篩選治療濕疹性皮炎的藥物。通過比較SRB和MTT兩種檢測方法選用更敏感、準(zhǔn)確的SRB方法以及用流... 

【文章來源】：大連醫(yī)科大學(xué)遼寧省

【文章頁數(shù)】：34 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

IFN-γ和antiFasAb共同作用誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡

一、體外誘導(dǎo) HaCaT 細(xì)胞凋亡1、IFN-γ上調(diào) HaCaT 細(xì)胞表面 Fas 的表達(dá)流式細(xì)胞儀檢測結(jié)果顯示未添加 IFN-γ 時(shí)即體外自然培養(yǎng)狀態(tài)下HaCaT 細(xì)胞表面有 Fas 抗原的表達(dá)，但是 10ng/ml 的 IFN-γ 可顯著增加HaCaT 細(xì)胞的 Fas 表達(dá)率，陽性率可達(dá)到 49.66％（P﹤0.05），而 1ng/ml的 IFN-γ 上調(diào) Fas 的表達(dá)不明顯（P﹥0.05）（圖 1）。2、antiFas Ab 誘導(dǎo) HaCaT 細(xì)胞凋亡如圖 2 所示：50ng/ml 的 IFN-γ 和 25ng/ml 的 antiFasAb 共同作用顯著誘導(dǎo) HaCaT 細(xì)胞凋亡，凋亡率可達(dá)到 21.5％。HaCaT 細(xì)胞表面雖然 Fas 表達(dá)較高，但是 25ng/ml 的 antiFas Ab 單獨(dú)作用時(shí)，不能引起HaCaT 細(xì)胞凋亡。凋亡的抑制劑 z-VAD-FMK 可有效抑制 IFN-γ 和 antiFas Ab 共同作用誘導(dǎo)的 HaCaT 細(xì)胞凋亡。

相同細(xì)胞數(shù)量時(shí)，SRB 方法檢測出的 OD 值要大于 MTT 果。2、SRB、MTT 方法的準(zhǔn)確性分析方法的準(zhǔn)確性是指對同一物質(zhì)的多個(gè)樣本多次檢一致程度[28]。SRB 方法檢測結(jié)果在同一板內(nèi)變異小，可重復(fù)性高（C是在不同的板間變異程度有所增加。MTT方法也得出相似。兩種方法間無顯著性差異（P﹥0.05）。表 2 為不同時(shí)間TT 檢測方法的變異程度。兩種方法的日間變異程度明顯，日間變異除了檢測方法本身的變異外，還包括不同時(shí)胞計(jì)數(shù)、細(xì)胞狀態(tài)、操作者本身的狀態(tài)、環(huán)境等其它因異在內(nèi)。從表中數(shù)值可看出 SRB 方法的變異小于 MTT 驗(yàn)結(jié)果也顯示兩者之間存在顯著性差異，P﹤0.05。這說的日間穩(wěn)定性好于 MTT 方法，可重復(fù)性高于 MTT 方法


本文編號：2976784