目的:制備促性腺激素釋放激素（gonadotropin releasing hormone,GnRH）與M2的融合蛋白（GnRH/M2）,研究由該融合蛋白致敏而成的DC疫苗對黑色素瘤B16F10細(xì)胞小鼠移植瘤的抑制作用。方法:構(gòu)建表達(dá)載體p ET28a-ans B-CGnRH3-hinge-MVP-M2質(zhì)粒,該質(zhì)粒轉(zhuǎn)化的工程菌在乳糖的誘導(dǎo)下,融合蛋白ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2以包涵體形式表達(dá),經(jīng)超聲破碎、洗滌和乙醇分級沉淀純化后,通過酸水解將蛋白多肽GnRH3-hinge-MVP-M2釋放出來,并通過DEAE-52陰離子交換層析進(jìn)行分離。將此融合多肽致敏DC獲得DC疫苗。構(gòu)建黑色素瘤B16F10細(xì)胞小鼠移植瘤模型,按接種疫苗不同,分為:環(huán)磷酰胺組（CTX）、GnRH/M2融合蛋白致敏DC組（GDC）、腫瘤細(xì)胞裂解物致敏DC組（BDC）、GnRH/M2融合蛋白致敏DC+環(huán)磷酰胺組（GDCTX）、腫瘤細(xì)胞裂解物致敏DC+環(huán)磷酰胺組（BDCTX）和生理鹽水組（NS）,觀察GnRH/M2疫苗對模型小鼠的移植瘤生長、CTL殺傷能力和T細(xì)胞增殖的作用。結(jié)果:成功構(gòu)建p E... 

【文章來源】：中國腫瘤生物治療雜志. 2016年04期 第468-475頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料與試劑
    1.2 GnRH3-hinge-MVP-M2融合蛋白表達(dá)載體的構(gòu)建
        1.2.1 引物設(shè)計
        1.2.2 p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP克隆載體的構(gòu)建
        1.2.3 重組表達(dá)載體p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2的構(gòu)建與鑒定
    1.3 融合蛋白的誘導(dǎo)表達(dá)、分離與純化
    1.4 融合蛋白的生物活性測定
    1.5 DC疫苗的制備
    1.6 DC疫苗對小鼠B16F10黑色素瘤的免疫治療
    1.7 LDH細(xì)胞毒性實驗檢測DC疫苗對模型小鼠CTL殺傷功能的影響
    1.8 混合淋巴反應(yīng)（MLR）實驗檢測DC疫苗對模型小鼠T細(xì)胞增殖能力的影響
    1.9 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 成功構(gòu)建并獲得p ET28a-ans B-C-GnRH3-hinge-MVP-M2表達(dá)載體
    2.2 M2基因片段正確插入p ET28a-ans B-C-Gn-RH3-hinge-MVP-M2表達(dá)載體
    2.3 誘導(dǎo)表達(dá)并分離、純化融合蛋白ans B-C-Gn-RH3-hinge-MVP-M2
    2.4 融合蛋白GnRH/M2能夠刺激脾細(xì)胞增殖
    2.5 成功制備不同抗原致敏的DC疫苗
    2.6 GnRH/M2組DC疫苗抑制移植瘤生長
    2.7 GnRH/M2組DC疫苗增強模型小鼠CTL的殺傷功能
    2.8 GnRH/M2組DC疫苗促進(jìn)小鼠T細(xì)胞增殖
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]黑素瘤的免疫治療進(jìn)展[J]. 臧學(xué)峰,唐曉義,張斌,陳虎.  中國腫瘤生物治療雜志. 2013(03)
[2]小鼠骨髓樹突狀細(xì)胞的培養(yǎng)擴增及生物學(xué)特性分析[J]. 彭福華,鐘秀風(fēng),胡學(xué)強,王敦進(jìn),朱燦勝,王玉鴿.  中國組織工程研究與臨床康復(fù). 2008(53)



本文編號：2910155