發(fā)布時間：2020-11-07 09:23

　　 目的:建立DNCB誘導(dǎo)的AD小鼠模型,研究TRPA1基因敲除對AD發(fā)病的作用,并探索其潛在機制。然后進一步探討TRPA1拮抗劑HC-030031對DNCB誘導(dǎo)的AD小鼠是否具有一定的治療作用。方法:(1)首先在野生雄性C57BL/6小鼠上建立DNCB誘導(dǎo)的AD模型,經(jīng)qRT-PCR、WB和免疫組化檢測背部皮損TRPA1 mRNA和蛋白的表達水平變化。(2)為進一步研究TRPA1在DNCB誘導(dǎo)的AD模型的作用及機制,再次建立DNCB誘導(dǎo)的AD模型,分為3組:TRPA1~(-/-)+DNCB組,WT+DNCB組以及空白組。造模中觀察小鼠的皮炎評分,耳部厚度,瘙癢評分的動態(tài)變化。造模結(jié)束后取小鼠血清以及耳背部皮損組織,經(jīng)HE染色評估病理變化,經(jīng)ELISA比較血清總IgE水平變化,經(jīng)甲苯胺藍染色評估肥大細胞浸潤程度,經(jīng)qRT-PCR檢測皮損組織炎癥因子mRNA水平變化,經(jīng)WB以及免疫熒光檢測巨噬細胞浸潤變化。(3)為探索TRPA1拮抗劑HC-030031對AD是否具有治療作用,再次建立DNCB誘導(dǎo)的AD模型,分為3組:HC-030031+DNCB組,WT+DNCB組和空白組,觀察小鼠的皮損嚴重程度及耳部厚度,瘙癢評分的變化。造模結(jié)束后,取耳背部皮損組織,檢測病理變化。結(jié)果:(1)皮損以及HE染色顯示在C57BL/6小鼠上成功建立DNCB誘導(dǎo)的AD模型,并發(fā)現(xiàn)背部皮損中TRPA1的mRNA和蛋白表達升高。(2)TRPA1~(-/-)組小鼠皮炎評分,耳部厚度,瘙癢評分明顯低于WT組小鼠,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。HE染色顯示TRPA1~(-/-)組小鼠表皮增生以及炎性細胞的浸潤程度較WT組小鼠減輕,同時TRPA1~(-/-)組小鼠真皮肥大細胞的浸潤減輕,而血清總IgE水平與WT組小鼠相比無明顯差異。qRT-PCR結(jié)果顯示:TRPA1~(-/-)組小鼠背部皮損前炎癥因子(IL-1β,TNF-α,IL-6)以及Th2炎癥因子(IL-4,IL-13)較WT小鼠下降而Th1炎癥因子INF-γ無明顯差異,同時發(fā)現(xiàn)TRPA1~(-/-)緩解了皮損巨噬細胞的浸潤。(3)經(jīng)HC-030031治療后,小鼠皮損嚴重程度,耳部厚度,瘙癢評分較WT組下降,且表皮增生以及炎性細胞的浸潤程度減輕。結(jié)論:在DNCB誘導(dǎo)的AD小鼠模型中,TRPA1缺陷不僅可緩解瘙癢,而且可能通過減輕肥大細胞浸潤、前炎癥及Th2炎癥因子和巨噬細胞的浸潤,發(fā)揮免疫保護作用。同時TRPA1拮抗劑HC-030031對DNCB誘導(dǎo)的AD小鼠具有一定的治療作用。
【學(xué)位單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R758.2
【部分圖文】：

圖 1 AD 造模方案Figure 1 Schematic protocol of DNCB -induced AD model鼠背部皮損、耳部腫脹程度及瘙癢評價照文獻報道[17]，皮損嚴重程度通過評估 4 個癥狀：水腫；紅斑/出屑/干燥，每種癥狀按照 0（無）、1（輕度）、2（中度）和 3（于藥物涂抹后合計每只小鼠的癥狀評分。采用游標(biāo)卡尺測量小測量 3 次后取其平均值。參照文獻報道[13]，首先將小鼠置于觀涂抹 DNCB 于小鼠的背部及耳部后 30min，然后讓操作者或者 10min 內(nèi)小鼠搔抓涂抹變應(yīng)原皮膚及耳部的次數(shù)。部皮損及耳部組織 HE 染色21 天時，處死小鼠后，剪取小鼠背部病灶/涂液部位皮膚以及耳部cm 大小，以 4%多聚甲醛進行固定 24h。然后經(jīng) 75%、85%、95

用 Graph Pad Prism6.0 軟件進行分析，計量資料以平均值 標(biāo)準誤數(shù)據(jù)使用獨立樣本 t 檢驗進行評估，P < 0.05 差異有統(tǒng)計學(xué)。生型 C57BL/6 小鼠上建立 DNCB 誘導(dǎo)的 AD 模型先在野生型 C57BL/6 上建立 DNCB 誘導(dǎo)的 AD 模型，結(jié)果顯示：以及耳部皮膚逐漸可見水腫、紅斑、脫屑、結(jié)痂等炎癥反應(yīng)，空白膚無明顯變化，與對照組鼠耳厚度相比，模型組小鼠耳厚度腫脹程ig.2A)。小鼠背部與耳部皮損組織病理顯示：模型組小鼠皮損角化、真皮淺層以淋巴細胞為主的炎性細胞浸潤，而對照組小鼠未見明Fig.2B）。以上實驗結(jié)果均表明在野生型 C57BL/6 小鼠建立 DNCB功。

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文Representative photographs of the dorsal and ear skin lesions from vehieventh days of the experiment. (B)Representative H&E staining of dorsaons from groups of mice on the last day of the experiment, Scale bar, 80 μmA1 在 DNCB 誘導(dǎo)的 AD 小鼠皮損中表達上調(diào)CR 分析皮損 TRPA1 mRNA 相對表達，結(jié)果顯示，與對照組 的 RNA 表達明顯上調(diào)，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(t=4.93，P=0.008ot 分析皮損 TRPA1 蛋白表達，結(jié)果顯示：與對照組相比，模型顯上調(diào)(Fig.3B)。經(jīng)免疫組化分析可見：與對照組相比模型PA1 在表皮、真皮均表達量明顯增加，結(jié)果如 Fig.3C 所示。
【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 薛如君;張錫寶;;神經(jīng)病理性瘙癢的研究進展[J];中國醫(yī)學(xué)文摘(皮膚科學(xué));2015年06期

本文編號：2873751