目的: 惡性黑色素瘤是常見皮膚惡性腫瘤,早期可以手術(shù)治療,晚期、轉(zhuǎn)移性腫瘤手術(shù)效果差,化療藥物效果欠佳,且有較大毒副作用。尋找新的有效治療藥物成為熱點(diǎn)。多西紫杉醇(Docetaxel,DOC)和姜黃素(Curcumine)是兩種近期被確證對(duì)惡性黑色素瘤有治療效果的藥物,但兩者存在水溶性差、過敏反應(yīng)多、作用時(shí)間短、使用途徑少、一定毒副作用等缺點(diǎn)。這些缺點(diǎn)嚴(yán)重限制了兩種藥物的效果和使用范圍。納米載藥系統(tǒng)擁有靶向特性、緩釋特性、高度穩(wěn)定性、低毒性。聚乙二醇(PEG)-聚己內(nèi)脂(PCL)殼核結(jié)構(gòu)納米微球具有雙向溶解性,本研究利用PEG-PCL分別包裹多西紫杉醇和姜黃素,在體外、體內(nèi)對(duì)這兩種載藥納米微粒的作用、副作用進(jìn)行了研究,探討納米微粒性狀、溶解性、藥物包裹的效率、靶向性、緩釋性、黑色素瘤腫瘤細(xì)胞殺傷性,及動(dòng)物實(shí)驗(yàn)效果和毒副作用。 方法: (1)采用開環(huán)聚合法(ring-opening method)合成聚乙二醇和聚己內(nèi)酯(mPEG-PCL)嵌合體;采用溶劑分散法制備載DOC的PEG-PCL殼核納米微粒(DOCNP),觀察是否達(dá)到預(yù)想效果。并觀察其水溶液顏色、透明度。以原子力顯微鏡、透射電鏡觀察粒子形態(tài),動(dòng)態(tài)光散射儀測定粒徑分布(D)及Zeta電位(U )。高效液相色譜法測定并計(jì)算出DOCNP在不同投藥比例時(shí)的包封率與載藥量。 (2)運(yùn)用透析法測定DOCNP與DOC裸藥累積體外釋放曲線并進(jìn)行比較,探討以PEG-PCL納米微粒作為載體系統(tǒng)對(duì)DOC作用時(shí)間的影響;用熒光顯微鏡觀察納米微粒在腫瘤細(xì)胞中的分布;用MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)比較DOCNP與DOC裸藥殺傷腫瘤細(xì)胞能力。 (3)用B16細(xì)胞注射ICR小鼠,制作異體移植的黑色素瘤小鼠模型。靜脈給以DOCNP、DOC,測量瘤體大小的變化,同時(shí)通過檢測小鼠體重變化、觀察一般情況比較載藥納米微粒與裸藥對(duì)小鼠的毒副作用。 (4)瘤體內(nèi)分別注射DOCNP和DOC裸藥,測量瘤體大小的變化,同時(shí)通過檢測小鼠體重變化、觀察一般情況比較載藥納米微粒與裸藥對(duì)小鼠的毒副作用。 (5)制備載姜黃素的PEG-PCL殼核納米微粒(姜黃素NP),觀察是否達(dá)到預(yù)想效果,并觀察其溶液顏色、透明度。以原子力顯微鏡、透射電鏡觀察粒子形態(tài),動(dòng)態(tài)光散射儀測定粒徑分布(D)及Zeta電位(U );測定姜黃素納米微粒包封率與載藥量。 (6)運(yùn)用透析法測定姜黃素NP與姜黃素裸藥釋放曲線并進(jìn)行比較,探討以PEG-PCL納米微粒作為載體系統(tǒng)對(duì)姜黃素作用時(shí)間的影響;用MTT細(xì)胞毒實(shí)驗(yàn)比較姜黃素載藥納米粒與姜黃素裸藥殺傷腫瘤細(xì)胞能力。 (7)用B16細(xì)胞注射ICR小鼠,制作異體移植的黑色素瘤小鼠模型,瘤體內(nèi)分別注射姜黃素納米粒和姜黃素裸藥,觀察瘤體大小的變化,同時(shí)通過檢測小鼠體重、觀察一般情況比較載藥納米微粒和裸藥對(duì)小鼠的毒副作用。 結(jié)果: (1)DOCPEG-PCL納米微粒在生理鹽水中溶解性明顯高于DOC裸藥,原子力顯微鏡、透射電鏡顯示微粒直徑均小于100nm。載藥納米微粒形態(tài)呈表面光滑的圓形。動(dòng)態(tài)光散射儀測定微粒電位-5mV ,遠(yuǎn)低于沒有PEG外殼的普通納米微粒表面的-35mv,證明PEG外殼降低了細(xì)胞對(duì)納米粒的排斥力。DOCNP的包封率達(dá)90%,最高載藥量達(dá)19.4%。 (2)在B16細(xì)胞中,DOCNP的釋放曲線明顯低于DOC裸藥的釋放曲線,提示DOCNP有良好的緩釋效果;免疫熒光顯示與香豆素-6共同包裹的DOCNP進(jìn)入了腫瘤細(xì)胞的細(xì)胞核周圍的細(xì)胞漿,提示有良好的靶向性;細(xì)胞毒試驗(yàn)顯示DOCNP殺死腫瘤細(xì)胞的效率較DOC裸藥略強(qiáng)。 (3)黑色素瘤移植瘤小鼠,靜脈注射DOCNP和DOC裸藥后,相同劑量組比較:DOCNP組小鼠腫瘤生長較裸藥組緩慢,兩組腫瘤生長速度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;DOCNP組小鼠體重減輕明顯低于DOC組。 (4)黑色素瘤移植瘤小鼠,瘤體內(nèi)注射DOCNP和DOC裸藥后,相同劑量比較:DOCNP組小鼠瘤內(nèi)注射腫瘤生長較靜脈注射緩慢,體重減輕低于靜脈注射小鼠。瘤內(nèi)注射DOCNP組小鼠腫瘤生長明顯較瘤內(nèi)注射DOC組緩慢,兩組腫瘤生長速度差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義;DOCNP組小鼠體重減輕明顯低于DOC組。 (5)姜黃素納米微粒生理鹽水中溶解度明顯高于姜黃素裸藥,透射電鏡、原子力顯微鏡顯示微粒直徑100 nm,形態(tài)呈表面光滑的圓形。動(dòng)態(tài)光散射儀測定平均微粒電位外殼的普通-7.6mV,低于無PEG外殼的納米微粒。姜黃素NP的包封率89%,最高載藥量達(dá)16.3%。 (6)在B16細(xì)胞中,姜黃素NP釋放曲線明顯低于姜黃素裸藥的釋放曲線,提示姜黃素NP有良好的緩釋效果;細(xì)胞毒試驗(yàn)提示姜黃素NP殺死腫瘤細(xì)胞的效率較姜黃素裸藥有增強(qiáng)。 (7)黑色素瘤移植瘤瘤體內(nèi)注射姜黃素NP和姜黃素裸藥后,姜黃素NP組小鼠腫瘤生長明顯較姜黃素組緩慢,姜黃素NP組小鼠體重減輕低于姜黃素裸藥組,一般情況優(yōu)于姜黃素組小鼠。 結(jié)論: (1)多西紫杉醇載藥納米微粒具有良好的水溶性,有緩釋特性;與多西紫杉醇裸藥比較體外有略高的殺黑色素瘤細(xì)胞效果;載藥納米粒靜脈注射較裸藥靜脈注射有明顯增強(qiáng)的抑制腫瘤生長的作用;載藥納米粒瘤內(nèi)注射較靜脈注射有明顯增強(qiáng)的抑制腫瘤生長的作用,副作用明顯降低;載藥納米粒瘤內(nèi)注射較裸藥瘤內(nèi)注射有明顯增高的抑制腫瘤生長的作用,副作用明顯降低。 (2)姜黃素載藥納米微粒具有良好的水溶性;與姜黃素裸藥比較體外殺腫瘤細(xì)胞效果有增強(qiáng);瘤內(nèi)注射抑制腫瘤生長效果較裸藥明顯增強(qiáng),副作用明顯降低。 (3)兩種載藥納米微粒在本研究中都表現(xiàn)出良好的治療效果和明顯減輕的毒副作用,納米載藥研究將為黑色素瘤的治療提供有力幫助。
【學(xué)位單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2009
【中圖分類】：R739.5
【部分圖文】：

紫杉醇 PEG-PCL 納米粒的構(gòu)建和鑒定紫杉醇PEG-PCL納米粒在生理鹽水中溶解度可達(dá)到20mg/ml,顯著藥在生理鹽水中的溶解度。多西紫杉醇 PEG-PCL 納米粒生理鹽水溶因納米級(jí)的微粒在溶液中對(duì)光線的散射引起（圖 1）。鄭東輝：載藥納米微粒對(duì)惡性黑色素瘤治療作用體內(nèi)、體外實(shí)驗(yàn)研究

able 1 Mean particle size and drug load efficiency of Docetaxel loadedanoparticles (DOCNP)anoparticles Particle size(nm)aPolydispersity Zeta potential(mV)DLC(%)bEE(%)clank npOCNP78.3±7.987.5±9.50.14±0.040.15±0.03－6.5±1.4－5.6±0.7 19.4±2.4 91±4.6The SD value was for the mean particle size obtained from the three measurementsf a single batch.DLC = Drug Loading ContentEE = Encapsulation Efficiency論文全文數(shù)據(jù)庫 2011年 第12期 醫(yī)藥衛(wèi)生科技輯 E072-

圖 4. 多西紫杉醇載藥納米微粒與多西紫杉醇裸藥的體外釋放曲線3.3 細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)圖 5 顯示了多西紫杉醇及香豆素-6 共載藥納米粒在 B16 細(xì)胞中的免疫熒光圖像。在圖 B 和 D 中，可觀察到的香豆素-6 主要位于細(xì)胞內(nèi)，提示香豆素-6 大多轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)，位于細(xì)胞核周圍的細(xì)胞質(zhì)中。從而，可以推測和香豆素-6 一起包裹在納米粒中的多西紫杉醇也和納米粒同時(shí)轉(zhuǎn)運(yùn)入細(xì)胞內(nèi)。

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 黃曉東;中藥黃連超細(xì)粉碎技術(shù)研究[D];華東理工大學(xué);2011年

2 朱中佳;甘草抗肝炎有效部位及其納米粒的制備[D];武漢理工大學(xué);2010年

3 吳莉莉;核殼納米微球的制備及其對(duì)藥物的包覆和釋放[D];濟(jì)南大學(xué);2011年

4 趙衛(wèi)忠;粒徑大小和炮制方法對(duì)納米雄黃抗腫瘤活性影響的研究[D];華東理工大學(xué);2011年

5 王金麗;荷載紫杉醇藥物的普朗尼克（F127）/聚乙烯亞胺（PEI）多功能膠束的構(gòu)建及其體內(nèi)外評(píng)價(jià)[D];山東大學(xué);2011年

6 楊菲;化學(xué)法制備雄黃量子點(diǎn)及其機(jī)理的研究[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2011年

7 趙慧敏;水溶性氟化物納米晶的制備和上轉(zhuǎn)換發(fā)光性質(zhì)[D];哈爾濱工業(yè)大學(xué);2011年

8 郭雪紅;齊墩果酸滴丸的制備及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)評(píng)價(jià)[D];天津大學(xué);2012年

9 周鈺;超聲電導(dǎo)經(jīng)皮透入微米中藥的鎮(zhèn)痛機(jī)理和應(yīng)用基礎(chǔ)研究[D];南方醫(yī)科大學(xué);2011年

10 初侃;微米中藥復(fù)方抗癌一號(hào)抗小鼠腫瘤的作用研究[D];中國人民解放軍第四軍醫(yī)大學(xué);2003年

本文編號(hào)：2824074