【摘要】： 銀屑病是一種皮膚科常見并易復(fù)發(fā)的慢性炎癥性皮膚病，其發(fā)病原 因極其復(fù)雜，至今尚未完全明了。研究報(bào)道它與感染、內(nèi)分泌機(jī)能障 礙、免疫功能紊亂、酶的改變及遺傳因素等相關(guān)。近年來許多學(xué)者認(rèn) 為T細(xì)胞的激活是銀屑病發(fā)病的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。角質(zhì)形成細(xì)胞和皮損區(qū)浸 潤的T細(xì)胞可視為銀屑病的主角，它們產(chǎn)生各種細(xì)胞因子，形成一個(gè) 特殊的網(wǎng)絡(luò)。在細(xì)胞因子的作用下，促使表皮呈現(xiàn)銀屑病特征性的過 度增殖。銀屑病的組織病理學(xué)主要表現(xiàn)為角質(zhì)形成細(xì)胞過度增生、炎 癥細(xì)胞聚集和真皮乳頭部血管擴(kuò)張三大特征，其中，角質(zhì)形成細(xì)胞過 度增生又是最主要的特點(diǎn)。角質(zhì)形成細(xì)胞過度增生常常伴有異常角化 過程，組織學(xué)表現(xiàn)為角化不全及顆粒細(xì)胞層消失，而生物化學(xué)則表現(xiàn) 為細(xì)胞角蛋白的表達(dá)異常。正常表皮角蛋白表達(dá)模式為：基底層主要 由K5/K14組成，基底層以上部分由K1/K10組成。而銀屑病表皮角蛋 白的表達(dá)模式發(fā)生了明顯的變化，基底層以上部分出現(xiàn)了小分子量的 角蛋白，角蛋白K14則呈現(xiàn)出較正常表皮過量的表達(dá)，但正常表皮所 第口翠巨大學(xué)俗士學(xué)位論不 表達(dá)的＊從10被代表過度增殖的角蛋白K6瓜 所代替。銀屑病患者 皮損區(qū)表達(dá)角蛋白K6、K14、K16的現(xiàn)象提示在這些角蛋白中可能存在 激活銀屑病特異性T細(xì)胞的自身關(guān)鍵表位。 在諸多細(xì)胞因子中，IL《0是最新被發(fā)現(xiàn)的一種能在正常人和銀 義 屑病患者體內(nèi)起廣泛調(diào)節(jié)作用的細(xì)胞因子。研究發(fā)現(xiàn)，IL《0在體外 可以促進(jìn)角質(zhì)形成細(xì)胞的增殖；IL－20的轉(zhuǎn)基因小鼠可以出現(xiàn)明顯的 皮膚損害，其組織病理學(xué)改變與銀屑病患者的皮損具有驚人的相似； IL－20受體是由a、D兩個(gè)亞單位組成的異二聚體，兩種受體亞單位 在人類正常皮膚中表達(dá)水平很低，而在銀屑病患者皮損中表達(dá)顯著增 高，提示IL－20在表皮功能和銀屑病發(fā)病中具有重要意義。 為了能夠更好地研究銀屑病的發(fā)病機(jī)制，曾經(jīng)有學(xué)者設(shè)計(jì)了多種 動(dòng)物模型，其中心得安乳劑外涂所致豚鼠耳背部皮膚產(chǎn)生銀屑病樣皮 損的方法簡單易行。 為進(jìn)一步從分子水平研究此種銀屑病動(dòng)物模型的可行性及其在應(yīng)用 研究中的使用前景，本實(shí)驗(yàn)擬進(jìn)行：1）5呢心得安乳劑外涂豚鼠耳背部 誘導(dǎo)銀屑病樣皮損，以建立豚鼠銀屑病的動(dòng)物模型，并證實(shí)該方法的 可重復(fù)性。2）檢測動(dòng)物模型皮損中幾－20及角蛋白K14、K16、K17的 表達(dá)水平。3）應(yīng)用幾七0和m 的反義寡核昔酸處理動(dòng)物皮損，并觀 察動(dòng)物模型皮損的改善程度。4）證實(shí)反義寡核昔酸局部外用在治療包 括銀屑病在內(nèi)的皮膚病中的可行性。 實(shí)驗(yàn)中首先取20只健康成年豚鼠（體重3004009，性別不拘人應(yīng) 用5％C’得安乳劑外涂豚鼠雙耳背部皮膚，每日3次，連續(xù)涂4周。取 t 材后切片，HE染色。結(jié)果顯示：全部標(biāo)本共40份均可見到不同程度 的棘層肥厚、角化不全、表皮突延伸呈棒狀、真皮乳頭上伸桿狀變及 毛細(xì)血管擴(kuò)張。應(yīng)用組織評(píng)分法（典型的銀屑病皮損評(píng)分在4．0－10．0 3 — — 之間）的計(jì)算結(jié)果顯示：實(shí)驗(yàn)組組織學(xué)評(píng)分為7．5648土0．6425，正常 對(duì)照組組織學(xué)評(píng)分為0．7582土0．1264，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理顯示差異非常顯 著（P＜0．of）。 應(yīng)用原位雜交技術(shù)，分別檢測了實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的豚鼠耳背部皮 損的幾－20、K14、K16和K17mRNA的表達(dá)情況。同時(shí)根據(jù)幾－20的核 昔酸序列設(shè)計(jì)了PCR引物和探針，提取兩組動(dòng)物相應(yīng)部位的組織mRNA 做反轉(zhuǎn)錄NR（RT－PCR），并與幾－20原位雜交的檢狽結(jié)果相對(duì)照。 結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)組皮損角質(zhì)形成細(xì)胞中幾七0、K14和K16的表達(dá)顯 著增加，而K17與對(duì)照組相比無明顯差異。對(duì)幾《0而言，實(shí)驗(yàn)組40 份標(biāo)本中，31份應(yīng)用 RT－PCR可檢測到 IL－20有高表達(dá)，檢測率為 77％。 而對(duì)照組表達(dá)陽性率只有25％u0份標(biāo)本中5份檢測出有表達(dá)，但均 為低表達(dá)人 這與應(yīng)用幾《0核酸探針原位雜交的實(shí)驗(yàn)結(jié)果基本一致。 為了進(jìn)一步了解幾－20、K16在動(dòng)物模型皮損發(fā)生中的作用，本 實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)并合成了針對(duì)幾－20和K16的反義寡核昔酸片段。選擇20只 豚鼠用5＄心得安乳劑誘導(dǎo)雙耳產(chǎn)生銀屑病樣皮損，將針對(duì)幾－20或K16 的反義寡核昔酸片段配制于乳劑基質(zhì)中，每組各取10只動(dòng)物，分別將
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2001
【分類號(hào)】：R758.63

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2800984