【摘要】：目的 觀察免疫抑制小鼠和健康小鼠在遭遇條件致病真菌——阿薩希絲孢酵母菌初期，皮膚組織基因表達(dá)的差異；篩選出宿主抵抗該真菌感染的免疫相關(guān)基因，并探討這些基因及其表達(dá)產(chǎn)物在防御阿薩希絲孢酵母菌感染發(fā)生過程當(dāng)中的作用，從真菌感染免疫學(xué)角度提高我們對(duì)于阿薩希絲孢酵母菌所導(dǎo)致的局部感染及系統(tǒng)性感染——播散性毛孢子菌病發(fā)病機(jī)制的認(rèn)識(shí)。 方法 12周齡、BCLB／C、雄性小鼠，共12只，隨機(jī)分成試驗(yàn)組和對(duì)照組，在接種條件致病真菌阿薩希絲孢酵母菌前3天，試驗(yàn)組小鼠給予環(huán)磷酰胺腹腔注射(200 mg／kg)，使該組小鼠的免疫功能受到抑制，對(duì)照組小鼠保持正常的免疫功能。3天后，選取小鼠腹部皮膚，皮內(nèi)接種阿薩希絲孢酵母菌細(xì)胞混懸液0.2ml(濃度為1×10~5CFU／ml，其中孢子比例＞95％)。接種后24h，處死全部小鼠，解剖獲取皮損組織，提取總RNA，，用不同的熒光染料Cy5(紅色)、Cy3(綠色)分別對(duì)實(shí)驗(yàn)組、對(duì)照組RNA經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄所獲的cDNA進(jìn)行標(biāo)記，將標(biāo)記后的cDNA與同一小鼠基因表達(dá)譜芯片進(jìn)行雜交，洗片后用不同波長(zhǎng)的激光對(duì)芯片進(jìn)行照射，來(lái)源于試驗(yàn)組與對(duì)照組的cDNA因標(biāo)記熒光染料的不同而分別產(chǎn)生紅色或綠色熒光，用scan array 4000掃描儀對(duì)芯片雜交熒光信號(hào)進(jìn)行掃描，并用Gene Pix3.0圖像處理軟件對(duì)所獲信號(hào)強(qiáng)度進(jìn)行分析。通過對(duì)兩種熒光信號(hào)相對(duì)強(qiáng)度的分析，得到實(shí)驗(yàn)、對(duì)照兩組基因表達(dá)的差異情況，利用Genebank及Pubmed等數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)所獲全部差異表達(dá)基因的功能進(jìn)行分析，從而篩選出免疫功能相關(guān)的差異表達(dá)基因，并對(duì)這些基因的表達(dá)產(chǎn)物在宿主抗阿薩希絲孢酵母菌感染過程中所發(fā)揮的作用進(jìn)行討論。 結(jié)果 在芯片所包含的4096條小鼠基因中，試驗(yàn)組與對(duì)照組之間共有243條基因的表達(dá)存在差異，經(jīng)過對(duì)這些基因表達(dá)產(chǎn)物功能的全面分析，共篩選出11條與小鼠抗阿薩希絲孢酵母菌感染免疫相關(guān)的差異表達(dá)基因，其中試驗(yàn)組編碼C2、CD22、CD53、CD209a、 第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文 CD79A結(jié)合蛋白lb、EP4受體、淋巴細(xì)胞抗原6復(fù)合體、腫瘤壞死因子可誘導(dǎo)蛋白cg12一1、 干擾素誘導(dǎo)蛋白PU以一G、工gG的FC高親和力受體1的基因表達(dá)下調(diào)，編碼結(jié)合珠蛋白 的基因表達(dá)上調(diào)。 結(jié)論本試驗(yàn)嘗試性的利用基因表達(dá)譜芯片分析技術(shù)，對(duì)免疫抑制小鼠和健康小鼠 在感染阿薩希絲抱酵母菌24小時(shí)后，皮損局部基因的表達(dá)情況進(jìn)行了初步的比較性研 究，共篩選出編碼CZ、CD53、結(jié)合珠蛋白等11條與免疫相關(guān)的差異表達(dá)基因，這些基 因表達(dá)的變化，導(dǎo)致了其編碼產(chǎn)物數(shù)量的改變，使宿主對(duì)阿薩希絲抱酵母菌的正常免疫 應(yīng)答功能發(fā)生障礙，而導(dǎo)致該菌感染的發(fā)生及播散。如免疫抑制組補(bǔ)體CZ基因的顯著 下調(diào)，將導(dǎo)致補(bǔ)體系統(tǒng)激活障礙，使膜攻擊復(fù)合體的形成減少，對(duì)阿薩希絲抱酵母菌的 溶細(xì)胞作用減弱，而C3b等具有調(diào)理作用的補(bǔ)體片段生成減少，將減弱巨噬細(xì)胞及中性 粒細(xì)胞對(duì)該菌的吞噬作用;免疫抑制組CD53基因表達(dá)下調(diào)，使巨噬細(xì)胞在氧化應(yīng)激狀 態(tài)下的自我保護(hù)能力降低，致使巨噬細(xì)胞的功能、數(shù)量發(fā)生改變，使宿主對(duì)阿薩希絲抱 酵母菌的清除能力降低;編碼EP4受體、CDZOga基因的下調(diào)將導(dǎo)致皮膚組織局部 Langethans及其它樹突狀細(xì)胞游出、移行發(fā)生障礙、減弱了該類細(xì)胞對(duì)阿薩希絲抱酵母 菌的抗原提呈能力;試驗(yàn)組編碼結(jié)合珠蛋白的基因表達(dá)上調(diào)，一方面可以防止過度急性 炎癥反應(yīng)的產(chǎn)生，而另一方面也可能為阿薩希絲抱酵母菌存活及播散提供了有利的條 件;篩選出的其它功能尚不明確的差異表達(dá)基因，可能具有潛在的研究?jī)r(jià)值，可作為進(jìn) 一步研究阿薩希絲抱酵母菌感染發(fā)生機(jī)制的候選基因。
【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2004
【分類號(hào)】：R756
【圖文】：

變性凝膠電泳顯示285、165兩條完整的條帶，285的亮度大約與實(shí)驗(yàn)組’/對(duì)照組與對(duì)照組’為平行管，所測(cè)RNA分別為實(shí)驗(yàn)NA經(jīng)等量混合后所獲的總RNA)

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐志偉,李文靜;B細(xì)胞表面的抑制性受體及其作用機(jī)理[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè));2000年06期

本文編號(hào)：2752008