【摘要】： 研究背景與目的 紫外線光療(包括UVA和UVB)是皮膚病治療的重要手段之一，中波紫外線UVB主要作用于表皮，波長為311-313nm的窄波UVB是UVB最有效的成分。近年來，NB-UVB被廣泛地應(yīng)用于臨床治療白癜風(fēng)、銀屑病、特應(yīng)性皮炎及其它皮膚病，并取得了較好的療效。表皮的黑素細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞均是NB-UVB輻射的主要靶細(xì)胞。 本研究分兩個部分探討NB-UVB輻射對表皮黑素細(xì)胞、角質(zhì)形成細(xì)胞的影響：1．不同NB-UVB輻射劑量和作用時間對體外培養(yǎng)的白癜風(fēng)患者遠(yuǎn)離皮損外觀正常皮膚及皮損邊緣處皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞形態(tài)、增殖活性及黑素合成功能的影響，并以正常人皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞為對照，確定黑素細(xì)胞增殖率和黑素合成的最高點(diǎn)，指導(dǎo)臨床設(shè)定NB-UVB照射治療白癜風(fēng)最佳的間隔時間。2．NB-UVB輻射對人角質(zhì)形成細(xì)胞株-HaCaT細(xì)胞凋亡形態(tài)、增殖活性及凋亡率的影響與NB-UVB輻射劑量及檢測時間的相關(guān)性，探討NB-UVB治療銀屑病的作用機(jī)理及最佳治療頻率。 研究方法 1．體外培養(yǎng)白癜風(fēng)患者遠(yuǎn)離皮損外觀正常皮膚、皮損邊緣處皮膚及正常人皮膚黑素細(xì)胞，采用HMB-45單克隆抗體免疫組化法對培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行鑒定；倒置顯微鏡觀察NB-UVB輻射對黑素細(xì)胞形態(tài)的影響；MTT法和NaOH法檢測NB-UVB輻射劑量(20—100 mJ／cm~2)和作用時間(輻射后48h、72h、96h)對黑素細(xì)胞增殖活性和黑素合成的作用。 2．以人角質(zhì)形成細(xì)胞株-HaCaT細(xì)胞為研究對象，以不同劑量(20—100mJ／cm~2)的NB-UVB輻射體外培養(yǎng)的HaCaT細(xì)胞，觀察輻射后不同時間(24h、48h、72h)HaCaT細(xì)胞損傷的形態(tài)學(xué)和增殖活性的變化；流式細(xì)胞儀檢測NB-UVB輻射對HaCaT細(xì)胞凋亡的影響。 結(jié)果 1．NB-UVB輻射黑素細(xì)胞后，細(xì)胞腫脹，樹突縮短增粗，黏附性下降。 NB-UVB輻射后48h，在實(shí)驗(yàn)劑量下可提高黑素細(xì)胞的黑素合成能力，輻射劑量≥60mJ／cm~2可抑制白癜風(fēng)患者遠(yuǎn)離皮損外觀正常皮膚及正常人皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞增殖，而輻射劑量≥40mJ／cm~2即可對白癜風(fēng)皮損邊緣處皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞增殖產(chǎn)生抑制作用；NB-UVB輻射后72h、96h，在實(shí)驗(yàn)劑量下可促進(jìn)黑素細(xì)胞增殖和黑素合成，對白癜風(fēng)遠(yuǎn)離皮損外觀正常皮膚及正常人皮膚黑素細(xì)胞作用更明顯，NB-UVB輻射后72h黑素細(xì)胞增殖率和黑素含量達(dá)到最高點(diǎn)。 2．NB-UVB輻射對HaCaT細(xì)胞具有明顯的損傷作用。 鏡下表現(xiàn)為細(xì)胞皺縮、碎片增多等形態(tài)變化；在接受不同劑量NB-UVB輻射后48h內(nèi)，隨著輻射劑量的增加，具有凋亡形態(tài)特征的HaCaT細(xì)胞逐漸增多，細(xì)胞增殖活性逐漸降低，48h后受損程度較輕，并有逐漸恢復(fù)跡象；在輻射后24h內(nèi)，20-100 mJ／cm~2的NB-UVB輻射可劑量依賴性地誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡。 結(jié)論 1．白癜風(fēng)皮損邊緣處皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞黑素合成功能異常，對NB-UVB輻射高度敏感，受光損傷的程度較重。 2．穩(wěn)定期白癜風(fēng)患者遠(yuǎn)離皮損外觀正常皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞與正常人皮膚培養(yǎng)的黑素細(xì)胞具有相似的生物學(xué)特性。 3．NB-UVB輻射后72h黑素細(xì)胞增殖率和黑素含量最高，白癜風(fēng)患者采用每周2次照射NB-UVB為最佳治療間隔時間。 4．NB-UVB輻射可使HaCaT細(xì)胞增殖活性呈劑量依賴式遞減，且NB-UVB輻射后48hHaCaT細(xì)胞光損傷的形態(tài)學(xué)變化和增殖抑制效應(yīng)最明顯，提示NB-UVB治療銀屑病的最佳照射頻率為3次／周。 5．NB-UVB輻射誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞凋亡具有顯著的劑量依賴性。 6．NB-UVB治療銀屑病的局部作用可能部分通過誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡，抑制細(xì)胞增殖，實(shí)現(xiàn)對角質(zhì)形成細(xì)胞過度增殖的調(diào)控。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R758.41
【圖文】：

傳代培養(yǎng)中，正常人黑素細(xì)胞仍具有多個細(xì)長突起，

正常人黑素細(xì)胞原代培養(yǎng)3天，光鏡下可見樹突狀

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 徐前喜,杜娟,何培英,張建中,朱鐵君;1α,25-二羥維生素D_3和中波紫外線對正常人黑素細(xì)胞增殖及黑素合成的影響[J];北京大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2004年05期

2 王雷,李春英,高天文;窄譜中波紫外線的生物學(xué)效應(yīng)及應(yīng)用[J];國外醫(yī)學(xué)(皮膚性病學(xué)分冊);2003年05期

3 景海霞;盛晚香;;當(dāng)歸多糖對豚鼠銀屑病樣皮損中角質(zhì)形成細(xì)胞凋亡的影響[J];武漢大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年03期

4 馬慧軍,朱文元,王大光,張汝芝;人頭皮毛囊外根鞘無色素黑素細(xì)胞的分離和純化培養(yǎng)進(jìn)一步研究[J];臨床皮膚科雜志;2004年02期

5 佟春光,張秀英,何焱玲,蘭東,程少為,曹梅,陳懿德;窄譜中波紫外線治療白癜風(fēng)的療效觀察[J];臨床皮膚科雜志;2005年05期

6 劉振祥,李世蔭,楊雪琴,張波;Fas Bax和bcl-2蛋白在銀屑病病人表皮細(xì)胞中的表達(dá)[J];中國皮膚性病學(xué)雜志;1999年01期

7 ;白癜風(fēng)臨床分型及療效標(biāo)準(zhǔn)(2003年修訂稿)[J];中華皮膚科雜志;2004年07期

本文編號：2732752