【摘要】：目的 對已定位的淺表播撒型汗孔角化癥致病區(qū)段的候選基因進行大規(guī)模突變篩查及突變分析,以識別該病的致病基因,進一步闡明汗孔角化癥的發(fā)病機制。 方法 抽提家系成員的外周血基因組DNA和正常人皮膚組織RNA。利用已知的網(wǎng)上資源對候選區(qū)域內(nèi)的基因進行搜索,然后利用皮膚組織RNA對候選基因進行RT-PCR,確定在皮膚中表達的基因,根據(jù)基因組序列設(shè)計PCR引物,用家系樣本的DNA做模板,進行PCR擴增,然后用SAP、ExonⅠ純化PCR產(chǎn)物。用Big DyeTerminator測序試劑盒進行測序反應(yīng),采用3700 DNA自動測序儀測序,再采用生物信息學(xué)方法處理測序結(jié)果,尋找突變位點,識別致病基因。 結(jié)果發(fā)現(xiàn)了標(biāo)記物D12s1671-D12s1605之間的24個基因在皮膚中表達。共篩查了這一區(qū)段包括SSH1、SART3基因在內(nèi)的60個基因,一共736個外顯子,發(fā)現(xiàn)了203個SNPs,其中有3個與家系4高度連鎖,即:KIAA0701 E20外顯子161bD處T/G雜合;FLJ10620 E8外顯子上游108bp處GG的雜合缺失;FLJ34221 E25外顯子22bp處G/A雜合。 結(jié)論發(fā)現(xiàn)了與家系4高度連鎖的3個SNPs,排除了60個候選基因是汗孔角化癥致病基因的可能性。 意義本研究發(fā)現(xiàn)了與家系4高度連鎖的3個SNPs更加支持了我們將DSP致病基因定位于染色體12q23.1-24.2的準(zhǔn)確性。同時排除了這一區(qū)域中60個候選基因是汗孔角化癥致病基因的可能性,為以后汗孔角化癥致病基因的研究節(jié)省了大量的人力物力。
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R758.73

【參考文獻】

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1 張學(xué)軍;第九屆國際皮膚科學(xué)大會學(xué)術(shù)精粹(二)[J];中華醫(yī)學(xué)信息導(dǎo)報;2004年17期

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本文編號：2710952