發(fā)布時間：2020-06-09 00:38

【摘要】： 衰老是指機體器官對環(huán)境改變的適應(yīng)性隨年齡增長而逐漸下降,進而易患疾病或引起死亡的一種現(xiàn)象。衰老一方面受機體預(yù)定的基因程序調(diào)控,另一方面由內(nèi)外“磨損和消耗”所引起,二者同時表現(xiàn)于細(xì)胞和分子水平。皮膚由于位于體表,其衰老主要分為自然衰老和光老化兩種形式,其分子機制非常復(fù)雜,特別是對皮膚自然衰老機制的研究并不深入。皮膚自然衰老機制代表性的學(xué)說有:基因調(diào)控學(xué)說、自由基學(xué)說、代謝失調(diào)學(xué)說。而遺傳基因改變是皮膚內(nèi)源性衰老的根本。 皮膚自然衰老臨床表現(xiàn)的一大特點就是皮膚干燥、脫屑、脆性增加,修復(fù)功能減退;組織學(xué)上則表現(xiàn)為皮膚變薄,表皮更新減慢,角質(zhì)層屏障功能下降,以及角質(zhì)層水合能力下降。正常角質(zhì)層含水量保持在10%-20%之間,使皮膚柔軟,不發(fā)生干燥、皸裂現(xiàn)象,但老年人皮膚含水量僅是正常的75%,所以表現(xiàn)為皮膚干燥。同時皮膚組織細(xì)胞的水分減少,細(xì)胞皺縮、老化、使皮膚出現(xiàn)細(xì)小皺紋,酶的活性降低。因此,皮膚的衰老與皮膚含水量、角質(zhì)層的水合能力及屏障功能有關(guān)。 水通道蛋白(AQP)是上世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)的一類能快速轉(zhuǎn)運水的膜整合蛋白。目前發(fā)現(xiàn)AQP在哺乳動物中有13個亞型,不同AQP亞型的分布具有組織、細(xì)胞、亞細(xì)胞特異性。根據(jù)這些水通道蛋白轉(zhuǎn)運功能特性的差異,將其分為兩個亞家族:水選擇通道亞家族(aquaporins),這類通道對水分子的通透性具有高度選擇性;另一個亞家族是水-甘油通道(aquaglyceroporins),這類通道除對水分子通透外,還對甘油和尿素等中性小分子也具有通透性。皮膚上主要分布的水通道蛋白是AQP3,它屬于水-甘油通道蛋白亞家族。目前發(fā)現(xiàn)AQP3參與多種生理、病理過程,它與尿液的濃縮、氣道表面的液體平衡、腸道水的吸收均有密切關(guān)系。而在皮膚的病理生理過程中,AQP3同樣可以轉(zhuǎn)運水、甘油到達表皮,因此對于表皮的屏障作用、水的保存有很大的意義。有研究者發(fā)現(xiàn),哺乳動物皮膚AQP3的缺失可導(dǎo)致皮膚干燥,角質(zhì)層水合作用下降,皮膚彈性下降,以及皮膚屏障修復(fù)延遲,生物合成功能受損,傷口愈合延遲。這些便提示我們AQP3參與皮膚衰老的過程。 為了驗證AQP3與皮膚衰老的關(guān)系,我們首先運用RT-PCR及Western blot研究不同年齡組非曝光部位皮膚組織中AQP3 mRNA、蛋白的表達量。結(jié)果顯示:1.青年組AQP3 mRNA表達水平為0.654±0.104,中年組AQP3 mRNA表達水平為0.685±0.143,老年組AQP3 mRNA表達水平為0.316±0.109;2.青年組AQP3蛋白表達水平為1.936±0.250,中年組1.813±0.224,老年組1.044±0.271。我們發(fā)現(xiàn)老年組皮膚中AQP3 mRNA、蛋白的表達量較青年組和中年組均顯著性減少(P值均＜0.01)。 第二部分,我們利用消化分離的方法原代培養(yǎng)了正常人非曝光部位皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞,進行了細(xì)胞鑒定后分別檢測了兩種細(xì)胞不同年齡段AQP3的表達,結(jié)果顯示:1.角質(zhì)形成細(xì)胞中,青年組AQP3 mRNA表達水平為1.240±0.205,中年組AQP3 mRNA表達水平為0.889±0.136,老年組AQP3 mRNA表達水平為0.392±0.083。AQP3mRNA表達隨年齡增加而減少。角質(zhì)形成細(xì)胞中AQP3蛋白表達水平為:青年組1.303±0.231,中年組0.980±0.164,老年組0.360±0.142,AQP3蛋白表達亦隨年齡增加而減少。2.成纖維細(xì)胞中,青年組AQP3mRNA表達水平為0.881±0.118,中年組AQP3 mRNA表達水平為0.757±0.167,老年組AQP3 mRNA表達水平為0.285±0.143。免疫細(xì)胞化學(xué)示AQP3蛋白表達水平為:青年組:0.378±0.123,中年組:0.355±0.112,老年組:0.171±0.060。WB示成纖維細(xì)胞中AQP3蛋白表達水平為:青年組0.792±0.092,中年組0.692±0.155,老年組0.375±0.112。老年組成纖維細(xì)胞AQP3 mRNA、蛋白的表達量較青年組和中年組均顯著性減少(P值均＜0.01)。3.青年組角質(zhì)形成細(xì)胞AQP3mRNA、蛋白表達明顯高于青年組成纖維細(xì)胞(P值均＜0.01),中年組角質(zhì)形成細(xì)胞AQP3蛋白表達明顯高于中年組成纖維細(xì)胞(P＜0.05),老年組角質(zhì)形成細(xì)胞AQP3 mRNA、蛋白表達與老年組成纖維細(xì)胞無顯著性差異。 綜上所述:AQP3在皮膚組織及體外原代培養(yǎng)的角質(zhì)形成細(xì)胞、成纖維細(xì)胞中的表達與年齡有關(guān)。AQP3的表達下降與皮膚自然衰老有關(guān)。
【圖文】：

博士學(xué)位論文第一章圖1總RNA瓊脂糖凝膠電泳圖1.2.1.2皮膚組織中 AQP3mRNA表達水平RT一PCR擴增產(chǎn)物經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳，可見AQP3條帶和GAPDH條帶清晰，無其它雜帶(圖2)。目的基因及內(nèi)參照明顯擴增，表明兩對PCR引物設(shè)計合理，特異性高，反應(yīng)條件合適，GAPDH條帶亮度較均一，提示各反應(yīng)體系反應(yīng)質(zhì)量穩(wěn)定，結(jié)果可信。 4OObP一一ZO0bP一圖2不同年齡組皮膚組織 AQP3mRNA表達情況 M:DNAmarker，，2泳道為青年組，3、4泳道為中年組

1.2.1.2皮膚組織中 AQP3mRNA表達水平RT一PCR擴增產(chǎn)物經(jīng) 1.5%瓊脂糖凝膠電泳，可見AQP3條帶和GAPDH條帶清晰，無其它雜帶(圖2)。目的基因及內(nèi)參照明顯擴增，表明兩對PCR引物設(shè)計合理，特異性高，反應(yīng)條件合適，GAPDH條帶亮度較均一，提示各反應(yīng)體系反應(yīng)質(zhì)量穩(wěn)定，結(jié)果可信。 4OObP一一ZO0bP一圖2不同年齡組皮膚組織 AQP3mRNA表達情況 M:DNAmarker，2泳道為青年組，3、4泳道為中年組，5、6泳道為老年組RT-PCR的結(jié)果顯示在不同年齡組皮膚組織中均可見 AQP3mRNA表達。通過測量各產(chǎn)物的光密度
【學(xué)位授予單位】：中南大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2008
【分類號】：R751

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前7條

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本文編號：2703905