【摘要】： 手癬(tinea manuum)、足癬(tinea pedis)及是指累及手掌和指間、足跖和趾間的皮膚癬菌感染，甲真菌病(onychomycosis)是指由任何真菌所致的甲感染，是一類常見的真菌感染性疾病。具有傳染性，發(fā)病率高，容易復(fù)發(fā)和再感染，雖不危及生命，但對患者的生活質(zhì)量造成不同程度的影響。手足癬甲真菌病的主要致病菌為紅色毛癬菌，其病原菌菌種構(gòu)成及分布存在地區(qū)差異；而且隨著人口流動、環(huán)境因素變化及治療干預(yù)等，同一地區(qū)的菌種也會發(fā)生變遷。尚缺乏蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病的發(fā)病情況及病原學(xué)流行病學(xué)的詳細(xì)資料。 目的：1．了解蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病發(fā)病情況及病原菌菌種頒布特點，為手足癬甲真菌病的流行病學(xué)研究奠定基礎(chǔ)，同時為臨床抗真菌藥物的合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。2．探討PCR結(jié)合RFLP的分子生物學(xué)技術(shù)鑒定皮膚癬菌的特異性和敏感性，以便在手足癬甲真菌病病原真菌的鑒定中推廣應(yīng)用。 方法：2006年1月～2006年12月，，對蘭州大學(xué)第二醫(yī)院皮膚科門診擬診為手足癬甲真菌病的患者，分別取其皮屑和／或甲屑做15％KOH直接涂片鏡檢。采用調(diào)查問卷的方式，詳細(xì)登記鏡檢陽性患者的相關(guān)臨床資料。對陽性標(biāo)本行沙堡葡萄糖瓊脂分離培養(yǎng)、鑒定菌種。采用真菌通用引物ITS1、ITS4對手足癬甲真菌病的優(yōu)勢致病菌rDNA的ITS區(qū)進(jìn)行PCR擴(kuò)增，從分子水平鑒定到紅色毛癬菌菌種的水平，經(jīng)鑒定的紅色毛癬菌進(jìn)一步對其可變區(qū)NTS(nontranscribedspacer)區(qū)兩個串聯(lián)重復(fù)單元TRS(tandemly repetitive subelements)即TRS-1、TRS-2區(qū)片段進(jìn)行了PCR擴(kuò)增，顯示同種不同株紅色毛癬菌基因型可能的差異。對基因組DNA采用限制性片段長度多態(tài)性(RFLP)分析，用HinfⅠ和TaqⅠ兩種限制性內(nèi)切酶對ITS1、ITS4的擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行酶切。 結(jié)果：1.262例真菌鏡檢陽性的手足癬甲真菌病患者，甲真菌病153例(58.40％)，足癬150例(57.25％)，手癬37例(14.12％)。鏡檢可見菌絲和／或孢子，以菌絲為主。分離菌株135株(陽性率51.53％)，其中紅色毛癬菌107株(占培養(yǎng)結(jié)果的79.26％)，白念珠菌17株(占12.59％)，犬小孢子菌9株(占6.67％)，紅酵母屬及鏈格孢霉屬各1株(各占0.74％)。2．引物ITS1、ITS4在紅色毛癬菌均擴(kuò)增出一約690bp特異性條帶；3．TRS—1區(qū)TrNTSF-2和TrNTSR-4引物把72株紅色毛癬菌共分為3型，呈現(xiàn)明顯的種內(nèi)多態(tài)性，在29例受試患者中，6例不同感染部位分離得到的菌株基因型有差異；TRS—2區(qū)TrNTSC—1和TrNTSR-1引物擴(kuò)增出一約500bp特異性條帶。4．HinfⅠ、TaqⅠ的酶切片段完全相同。 結(jié)論：1．蘭州地區(qū)手足癬甲真菌病的致病菌種比較單一，優(yōu)勢致病菌為紅色毛癬菌；2．引物ITS1、ITS4可以把紅色毛癬菌特異地鑒定到種的水平，從而使臨床快速鑒定該菌成為可能；3．TRS—1區(qū)TrNTSF-2和TrNTSR-4引物可以對紅色毛癬菌進(jìn)行種內(nèi)分型，而TRS—2區(qū)TrNTSC-1和TrNTSR-1引物也可以特異地鑒定紅色毛癬菌。多部位紅色毛癬菌感染患者存在不同型別菌株的感染，提示部分多部位皮膚癬菌感染患者不同部位皮膚癬菌感染可能為多菌株的混合感染。4．內(nèi)切酶HinfⅠ和TaqⅠ也可以特異地鑒定紅色毛癬菌。
【圖文】：

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本文編號：2697753