【摘要】：背景:眾所周知紫外線為黃褐斑等色素沉著性皮膚病的主要病因之一,亦是白癜風(fēng)等色素脫失性皮膚黏膜疾病發(fā)病的誘因及治療手段之一。紫外線暴露后的治療策略多集中于黑素細(xì)胞增殖及黑素合成等中下游環(huán)節(jié),而針對其始動環(huán)節(jié)的靶向治療較少。瞬時受體電位錨蛋白1(Transient Receptor Potential Ankyrin 1,TRPA1)作為一種非選擇性鈣離子滲透型通道參與細(xì)胞的多種生命活動。近年來有研究表明在表皮黑素細(xì)胞中,紫外線激活TRPA1通道增加細(xì)胞內(nèi)鈣離子內(nèi)流,促進(jìn)早期的黑素合成。Bellono等研究團(tuán)隊提出了TRPA1可能是唯一的眼外光轉(zhuǎn)導(dǎo)通路的理論。在表皮細(xì)胞中,黑素細(xì)胞產(chǎn)生的黑素并通過吞噬向角質(zhì)形成細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。此外,研究表明鈣離子在細(xì)胞吞噬的過程中起著重要的作用。因此研究TRPA1光轉(zhuǎn)導(dǎo)通路在表皮角質(zhì)形成細(xì)胞中的作用及其機(jī)制,對于深入了解紫外線相關(guān)色素障礙性皮膚病發(fā)病機(jī)制及調(diào)節(jié)黑素小體轉(zhuǎn)運(yùn)的上游機(jī)制具有重要意義。目的:1.明確瞬時受體電位錨蛋白1在角質(zhì)形成細(xì)胞中的光轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。2.探討瞬時受體電位錨蛋白1對角質(zhì)形成細(xì)胞吞噬功能的影響。方法:1.瓊脂糖凝膠電泳、實時熒光定量PCR(Real-time Quantitative Polymerase Chain Reaction,qPCR)檢測人永生化角質(zhì)形成細(xì)胞系(HaCaT細(xì)胞)有TRPA1基因的表達(dá)。2.Western Blot法檢測HaCaT細(xì)胞中TRPA1蛋白的表達(dá)。3.流式細(xì)胞儀檢測到UVA、UVB照射后,HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流,以及激動或拮抗TRPA1后,HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流。4.激光共聚焦顯微技術(shù)檢測UVA、UVB照射后,TRPA1通道對HaCaT細(xì)胞吞噬功能的影響。結(jié)果:1.瓊脂糖凝膠電泳、qPCR和Western Blot檢測到HaCaT細(xì)胞中有TRPA1基因及蛋白的表達(dá)。2.在UVA或者UVB的照射下,流式細(xì)胞儀檢測HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流顯著增高。3.流式細(xì)胞儀檢測激動TRPA1通道HaCaT細(xì)胞鈣離子的內(nèi)流顯著增高,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子的內(nèi)流顯著降低。4.流式細(xì)胞儀檢測激動TRPA1通道HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著減少。5.激光共聚焦顯微鏡觀察激動TRPA1通道HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著增多,在UVA或者UVB的照射下,拮抗TRPA1通道HaCaT細(xì)胞吞噬熒光微球的數(shù)量顯著減少。結(jié)論:1.UVA及UVB均通過激活TRPA1通道,誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞視黃醛依賴性鈣離子內(nèi)流,即TRPA1通路在角質(zhì)形成細(xì)胞中具有光轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。2.UVA及UVB均通過TRPA1通路增強(qiáng)HaCaT細(xì)胞的細(xì)胞吞噬功能。
【圖文】：

；采用 qPCR 法檢測 TRPA1-HEK293T 細(xì)胞（陽性對RPA1mRNA 的相對含量分別為：0.927±0.029、0.311檢測對照組 HEK293T 細(xì)胞（TRPA1 質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞右有 TRPA1 蛋白的免疫條帶（如所示圖 2）。

1 基因的表達(dá)。A：瓊脂糖凝膠電泳可見 Ha物，大小約 5000bp；B：圖中 TRPA1-HEK29可見 HaCaT 細(xì)胞中有 TRPA1 mRNA 的表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R758.1

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本文編號：2680597